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目的 探索神经再生素(Nerve Regeneration Factor,NRF)诱导PC12细胞神经元性分化的潜在能力.初步探讨NRF作用于PC12细胞的信号转导途径.方法采用细胞培养方法,观察NRF在低血清的情况下,诱导PC12细胞发生的形态学改变;采用免疫荧光细胞化学法,观察神经元标志性物质一低分子量神经丝蛋白(NF-L)在NRF诱导分化的PC12细胞中的表达,从而鉴定NRF诱导的分化细胞;采用MTT法检测NRF对无血清培养的PC12细胞存活率的影响.为了研究与NRF促分化、促存活有关的的信号转导通路,采用磷酸化的ERK1/2单克隆抗体悬珠通过免疫共沉淀的方法在细胞裂解液中提取磷酸化的ERK1/2;然后将其与Elk-1融合蛋白共孵育;通过Western Blot法,采用磷酸化Elk-1融合蛋白单克隆抗体检测NRF不同浓度(0.01μg/ml、0.1μg/ml、1μg/ml)及不同作用时间(0、15min、30min、1h、2h)对无血清培养的PC12细胞ERK1/2活性的影响;还分别运用MEK1/2阻断剂U0126、PKC广谱阻断剂Go6983和酪氨酸蛋白激酶阻断剂genistein,观察NRF激活ERK1/2是否需要其上游信号蛋白MEK1/2的激活,是否需要某种PKC的参与,是否是通过Trk受体所介导的;采用RT-PCR的方法观察NRF对无血清培养的PC12细胞中ERK1/2下游调控的即早基因c-fos的表达变化.实验采用NGF为阳性对照.结论 NRF具有诱导PC12细胞神经元性分化的作用及保护无血清培养的PC12细胞.NRF可以激活ERK1/2信号转导途径.NRF激活ERK1/2必须通过MEK1/2的活化,同时可能部分依赖于某种亚类PKC的活化.但NRF不通过Trk受体介导ERK1/2的活化.而且,NRF对即早基因c-fos表达的影响与其对ERK1/2的活化作用可能有关.这表明NRF诱导PC12细胞分化作用可能是通过ERK1/2信号转导途径实现的,但是它激活ERK1/2作用途径与NGF有所不同.该研究为进一步深入探索NRF的作用机制提供基础.