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目的：研制能够模拟真实临床样本且无生物传染危险性的沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis，CT)聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)检测质控物，并用于临床PCR实验室CT检测的室间质量评价。
方法：在充分查阅文献的基础上，明确国内外已有文献报道的CT PCR检测的靶核酸序列，选择最普遍应用的CT质粒序列，采用重叠(0verlap)PCR、分子克隆等技术构建含有所选择的常用检测CT质粒目的序列的重组真核表达载体，即pTARGETTM-CT质粒，然后，将载体以脂质体转染的方式转染入宫颈上皮细胞(HTB-siha细胞)中，收集细胞，经一定浓度置于细胞培养液中，即成为能模拟CT检测临床样本的细胞质控物。最后观察所得质控物对目前国内常用商品试剂盒的适用性及在4℃、37℃及室温条件下的稳定性。将该细胞原液适当稀释后，组成含阴阳性的共5份标本的样本盘，发至全国各开展临床CT检测的实验室，对回报结果进行统计。
结果：成功构建了含CT质粒(178-610)、(1219-1993)、(2471-3260)、(5239-5864)、(6722-7499)等五个片段的重组真核表达载体，并转入宫颈上皮细胞(HTB-siha细胞)中，而得到了可模拟临床样本的CT PCR检测的质控物，采用深圳匹基、中山达安商品CT PCR检测试剂盒对转染后样本进行检测得阳性结果；定量为3.21×108拷贝/ml；倍比稀释后较高浓度样本检测结果呈梯度下降、10倍稀释循环阈值(CT)相差约3.3；原液、1∶10、1∶102、1∶103稀释液的循环阈值分别为：15.46、18.83、22.00、26.87；较低浓度样本检测结果不稳定。对不同浓度后在4℃、37℃及室温条件下保存一个月的样本的检测结果进行随机区组的两因素方差分析后发现P＞0.05，在各温度下保存的样本经检测后的结果无显著性差异，所构建的质控样本至少可以稳定保存一个月。对已回报结果进行统计后发现：88家临床检测实验室对1∶100倍稀释的样本的检测符合率平均为100％，对1∶1000和1∶10000的样本的检测符合率为98.9％。对阴性样本符合率为100％。
结论：利用重叠PCR与双酶切的方法，建立了一种将多间隔片段连接并构建入同一载体的简便有效的方法。成功地得到了无生物传染危险性可模拟临床标本的CT PCR检测质控物。可有效地用于临床实验室室间质评，证明该质控物适用性很好；质评结果表明，临床实验室对于CT的检测灵敏度较高。