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目的：
研究桃红四物汤(THSWD)延缓BALB/c小鼠胚胎成纤维细胞(BALB/c3T3，简称3T3)生长的作用及其可能途径，探讨THSWD是否通过调节bFGF进而影响ERK通路来延缓细胞生长。
方法：
(1)通过网络药理学技术，初筛THSWD对于IgAN的作用靶点。查找THSWD中有效活性成分及其对应靶点；查找IgAN的疾病靶点，构建“药物-活性成分-靶点”网络，通过GO富集分析及KEGG分析THSWD作用于IgAN的分子机制。
(2)在(1)的基础上，选择相关信号通路，研究THSWD影响3T3细胞生长、增殖及其分子机制。
bFGF过表达部分：空白对照组用含20%正常大鼠血清培养基培养48h；THSWD组用含20%含药血清培养基培养48h；bFGF过表达组为bFGF过表达慢病毒(MOI=70)转染24h后，用含20%正常大鼠血清培养基继续培养48h；bFGF过表达+THSWD组转染慢病毒后，用含20%含药血清培养基继续培养48h。
bFGF沉默部分：空白对照组同上；shRNA1组，shRNA2组，shRNA3组为bFGF沉默慢病毒(MOI=30)转染24h后用含20%正常大鼠血清培养基继续培养48h。
PD98059阻断剂干预部分：空白对照组同上；THSWD组同上；PD98059组用含20μmol?L-1PD98059的20%正常大鼠血清培养基；PD98059+THSWD组用含20μmol?L-1PD98059的20%含药血清培养基，分别培养48h。
从细胞形态，细胞活性，细胞周期，bFGF、ERK1/2基因及磷酸化蛋白的表达等方面进行检测，数据以单因素方差分析或独立样本t检验方法进行统计分析。
结果：
(1)网络药理学结果表明，THSWD通过ERK等信号通路干预IgAN。
(2)bFGF过表达部分：
空白对照组与空病毒组细胞活性无显著差异(P＞0.05)；
与空白对照组相比，THSWD组细胞活性降低(P＜0.01)；G0G1期占比增高、S期占比降低(P＜0.05)；bFGFmRNA及蛋白、ERK1/2mRNA、p-ERK1/2蛋白表达量降低(P＜0.01)；bFGF过表达组细胞活性升高(P＜0.01)；G0G1期占比降低、S期和G2M期占比升高(P＜0.05)；bFGFmRNA及蛋白、ERK1/2mRNA、p-ERK1/2蛋白表达量升高(P＜0.01)；bFGF过表达+THSWD组细胞活性升高(P＜0.01)；G0G1期占比降低、G2M期占比升高(P＜0.01)；bFGF、ERK1/2mRNA表达量升高(P＜0.01)。与bFGF过表达组比，bFGF过表达+THSWD组细胞活性降低(P＜0.05)。
与THSWD组比，bFGF过表达组和bFGF过表达+THSWD组G0G1期占比降低、S期占比升高、G2M期占比升高(P＜0.01)。bFGF过表达组bFGFmRNA及蛋白、ERK1/2mRNA、p-ERK1/2蛋白表达量升高(P＜0.01)；bFGF过表达+THSWD组bFGF、ERK1/2mRNA表达量升高(P＜0.01)，p-ERK1/2蛋白表达量升高(P＜0.01)。
与bFGF过表达组比，bFGF过表达+THSWD组G0G1期占比升高、G2M期占比降低(P＜0.05)；bFGFmRNA及蛋白、ERK1/2mRNA、p-ERK1/2蛋白表达量降低(P＜0.01)。4组间ERK1/2蛋白表达量差异无统计学意义(P＞0.05)。
以上结果提示我们：bFGF可降低G0G1期、升高S期和G2M期占比,促进细胞增殖，降低细胞活性。bFGF也可升高p-ERK1/2蛋白表达。THSWD可升高G0G1期、降低S期占比抑制细胞增殖，降低细胞活性。THSWD可以降低bFGF及p-ERK1/2的表达。
(3)bFGFshRNA部分：
空白对照组与bFGFshRNA组间细胞活性无显著差异(P＞0.05)，故未进行后续机制研究。说明设计的干扰引物不能有效干扰目的蛋白的表达，提示采取其他方法进行本研究的反向验证。
(4)PD98059阻断剂部分
与空白对照组比，THSWD组、PD98059组、PD98059+THSWD组细胞活性均降低(P＜0.05)；THSWD组和PD98059+THSWD组G0G1期占比增高，S期占比降低(P＜0.01)；PD98059组G0G1期占比升高(P＜0.05)；4组之间G2M期占比无显著差异(P＞0.05)。THSWD组bFGFmRNA及蛋白表达降低(P＜0.05)；THSWD组、PD98059组和PD98059+THSWD组ERK1/2mRNA和p-ERK1/2蛋白表达降低(P＜0.05)。
与THSWD组比，PD98059+THSWD组细胞活性降低(P＜0.05)，PD98059组G0G1期占比降低、S期占比升高(P＜0.01)。PD98059组和PD98059+THSWD组p-ERK1/2蛋白表达下降(P＜0.05)。
与PD98059组比，PD98059+THSWD组细胞活性降低(P＜0.05)；G0G1期占比升高、S期占比降低(P＜0.01)。
上述比较说明：THSWD、PD98059可以升高G0G1期、降低S期占比抑制细胞增殖，降低细胞活性。其中THSWD可以降低bFGF和p-ERK1/2的表达。PD98059可以降低p-ERK1/2的表达。
结论：
THSWD可通过抑制bFGF来影响p-ERK1/2的表达，调节细胞周期，延缓BALB/c3T3细胞的生长。
研究桃红四物汤(THSWD)延缓BALB/c小鼠胚胎成纤维细胞(BALB/c3T3，简称3T3)生长的作用及其可能途径，探讨THSWD是否通过调节bFGF进而影响ERK通路来延缓细胞生长。
方法：
(1)通过网络药理学技术，初筛THSWD对于IgAN的作用靶点。查找THSWD中有效活性成分及其对应靶点；查找IgAN的疾病靶点，构建“药物-活性成分-靶点”网络，通过GO富集分析及KEGG分析THSWD作用于IgAN的分子机制。
(2)在(1)的基础上，选择相关信号通路，研究THSWD影响3T3细胞生长、增殖及其分子机制。
bFGF过表达部分：空白对照组用含20%正常大鼠血清培养基培养48h；THSWD组用含20%含药血清培养基培养48h；bFGF过表达组为bFGF过表达慢病毒(MOI=70)转染24h后，用含20%正常大鼠血清培养基继续培养48h；bFGF过表达+THSWD组转染慢病毒后，用含20%含药血清培养基继续培养48h。
bFGF沉默部分：空白对照组同上；shRNA1组，shRNA2组，shRNA3组为bFGF沉默慢病毒(MOI=30)转染24h后用含20%正常大鼠血清培养基继续培养48h。
PD98059阻断剂干预部分：空白对照组同上；THSWD组同上；PD98059组用含20μmol?L-1PD98059的20%正常大鼠血清培养基；PD98059+THSWD组用含20μmol?L-1PD98059的20%含药血清培养基，分别培养48h。
从细胞形态，细胞活性，细胞周期，bFGF、ERK1/2基因及磷酸化蛋白的表达等方面进行检测，数据以单因素方差分析或独立样本t检验方法进行统计分析。
结果：
(1)网络药理学结果表明，THSWD通过ERK等信号通路干预IgAN。
(2)bFGF过表达部分：
空白对照组与空病毒组细胞活性无显著差异(P＞0.05)；
与空白对照组相比，THSWD组细胞活性降低(P＜0.01)；G0G1期占比增高、S期占比降低(P＜0.05)；bFGFmRNA及蛋白、ERK1/2mRNA、p-ERK1/2蛋白表达量降低(P＜0.01)；bFGF过表达组细胞活性升高(P＜0.01)；G0G1期占比降低、S期和G2M期占比升高(P＜0.05)；bFGFmRNA及蛋白、ERK1/2mRNA、p-ERK1/2蛋白表达量升高(P＜0.01)；bFGF过表达+THSWD组细胞活性升高(P＜0.01)；G0G1期占比降低、G2M期占比升高(P＜0.01)；bFGF、ERK1/2mRNA表达量升高(P＜0.01)。与bFGF过表达组比，bFGF过表达+THSWD组细胞活性降低(P＜0.05)。
与THSWD组比，bFGF过表达组和bFGF过表达+THSWD组G0G1期占比降低、S期占比升高、G2M期占比升高(P＜0.01)。bFGF过表达组bFGFmRNA及蛋白、ERK1/2mRNA、p-ERK1/2蛋白表达量升高(P＜0.01)；bFGF过表达+THSWD组bFGF、ERK1/2mRNA表达量升高(P＜0.01)，p-ERK1/2蛋白表达量升高(P＜0.01)。
与bFGF过表达组比，bFGF过表达+THSWD组G0G1期占比升高、G2M期占比降低(P＜0.05)；bFGFmRNA及蛋白、ERK1/2mRNA、p-ERK1/2蛋白表达量降低(P＜0.01)。4组间ERK1/2蛋白表达量差异无统计学意义(P＞0.05)。
以上结果提示我们：bFGF可降低G0G1期、升高S期和G2M期占比,促进细胞增殖，降低细胞活性。bFGF也可升高p-ERK1/2蛋白表达。THSWD可升高G0G1期、降低S期占比抑制细胞增殖，降低细胞活性。THSWD可以降低bFGF及p-ERK1/2的表达。
(3)bFGFshRNA部分：
空白对照组与bFGFshRNA组间细胞活性无显著差异(P＞0.05)，故未进行后续机制研究。说明设计的干扰引物不能有效干扰目的蛋白的表达，提示采取其他方法进行本研究的反向验证。
(4)PD98059阻断剂部分
与空白对照组比，THSWD组、PD98059组、PD98059+THSWD组细胞活性均降低(P＜0.05)；THSWD组和PD98059+THSWD组G0G1期占比增高，S期占比降低(P＜0.01)；PD98059组G0G1期占比升高(P＜0.05)；4组之间G2M期占比无显著差异(P＞0.05)。THSWD组bFGFmRNA及蛋白表达降低(P＜0.05)；THSWD组、PD98059组和PD98059+THSWD组ERK1/2mRNA和p-ERK1/2蛋白表达降低(P＜0.05)。
与THSWD组比，PD98059+THSWD组细胞活性降低(P＜0.05)，PD98059组G0G1期占比降低、S期占比升高(P＜0.01)。PD98059组和PD98059+THSWD组p-ERK1/2蛋白表达下降(P＜0.05)。
与PD98059组比，PD98059+THSWD组细胞活性降低(P＜0.05)；G0G1期占比升高、S期占比降低(P＜0.01)。
上述比较说明：THSWD、PD98059可以升高G0G1期、降低S期占比抑制细胞增殖，降低细胞活性。其中THSWD可以降低bFGF和p-ERK1/2的表达。PD98059可以降低p-ERK1/2的表达。
结论：
THSWD可通过抑制bFGF来影响p-ERK1/2的表达，调节细胞周期，延缓BALB/c3T3细胞的生长。