【摘 要】
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本研根据已发表的文献,启动子的串联能增强外源基因的表达,改造花椰菜病毒的35S启动子,将质粒pBLG双35S启动子双酶切切下,连接到克隆载体pUC18上进行测序,经序列分析后将此双
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本研根据已发表的文献,启动子的串联能增强外源基因的表达,改造花椰菜病毒的35S启动子,将质粒pBLG双35S启动子双酶切切下,连接到克隆载体pUC18上进行测序,经序列分析后将此双35S启动子连接到克隆载体pJIT60上,与pJIT60上本身含有的双35S启动子串联连接,构建一个含两个A区,四个B区T35S,并将T35S启动子连接到克隆载体pUC18上进行测序,经序列分析后,通过酶切、连接、转化将T35S启动子连接到植物表达载体pBLGvp4-st上,构建了植物表达载体pBLGT35Svp4-st。利用农杆菌介导法,将植物表达载体pBLGT35Svp4-st和pBLGvp4-st转化苜蓿,经卡那霉素(Kan)多重筛选,获得抗性植株。结果:T35S经序列分析后,T35S启动子两个A区同源率达到83.50﹪,四个B区同源率为80.31﹪。对植物表达载体pBLGT35Svp4-st进行BamHI和SacⅠ双酶切鉴定,可切下一大小约1491bp的目的条带,与理论值一致。对转基因苜蓿随机选取几株生长良好植株进行Western-Dot点杂交检测,结果表明:在进行Western-Dot点杂交检测时大多样品出现杂交信号。
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