海洋放线菌H74-18的鉴定及活性物质的研究

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随着广谱抗菌药物和免疫抑制剂的大量应用,真菌感染的发病率呈上升趋势,特别是深部真菌感染日益引起人们关注,抗深部真菌药物的研究是目前抗微生物药物的研究热点之一。海洋微生物生活在高盐、高压、低温、低光照、寡营养等特殊的环境中,可以产生分子结构新颖独特、生物活性高的次生代谢物质,这在医药领域己经得到证实,是当前倍受重视的筛选抗真菌药物的重要资源宝库。 本论文以深部真菌感染的主要致病菌白色念珠菌(Candida albicans)为指示菌,从2632株放线菌中筛选得到92株能产生抗真菌活性物质的菌株,经过复筛得到抗菌效果最好的是海洋放线菌H74-18。通过对该菌株的形态特征,培养特征和生理生化特征的研究,将其归为链霉菌属金色类群,对其16S rDNA序列测定和系统发育分析表明:该菌株与Streptomyces antibioticus同源性最高为99.9%,但在培养特征和生理生化特征上与Streptomyces antibioticus又有显著差异,因此判定H74-18为链霉菌金色类群新种抗白色念珠菌链霉菌Streptomyce antialbonostocticus。 采用纸片法测定菌株H74-18的抑菌活性,结果显示它对黄瓜疫霉菌(Phytophthora cucumisativus)、黄瓜炭疽病菌(Colletorichum cucumisativus)、辣椒疫霉病菌(Phytophthora capsici)、辣椒炭疽病菌(Colletotrichum capsici)、玉米小斑病菌(Bipolaris maydis)、隐球菌(Cryptoccocus)抑制效果好,对茄青枯病菌(Ralstonia solanacearumcomb)、桃细菌性穿孔病菌(Xanthomonas pruni)有抑制作用。 根据我们对菌株H74-18的发酵条件进行的初步研究,得到其优化发酵条件为:基础培养液,初始pH值7.0~7.2,种龄48h,接种量10%,发酵温度:28℃,搅拌速度:300r/min培养3d。并在此条件下进行了30L罐发酵放大实验。 菌株H74-18产生的活性物质不溶于水,因此发酵液无抑菌活性,对其菌丝用70%乙醇浸泡,乙酸乙酯萃取得到活性物质粗提物。通过硅胶柱层析,重结晶,高效液相色谱分离得到活性组份S,经高效液相色谱分析,纯度达97.5%。运用核磁共振(1H-NMR,13C-NMR, ROESY)、质谱(ESIMS)和紫外光谱(UV)等现代波谱技术对S进行结构鉴定,初步得出S为环肽类化合物。
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