【摘 要】
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(1)进一步改进现有的真核表达和纯化HPV16L1蛋白系统,寻找一条简便、省时、便宜、适合中国国情及发展中国家HPV VLP疫苗的制备方法.(2)探讨HPV16的兼有预防与治疗功能的新型D
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(1)进一步改进现有的真核表达和纯化HPV16L1蛋白系统,寻找一条简便、省时、便宜、适合中国国情及发展中国家HPV VLP疫苗的制备方法.(2)探讨HPV16的兼有预防与治疗功能的新型DNA疫苗的可能性.(3)寻找能制备可明显增强阴道粘膜免疫的新型HPV预防性疫苗.利用昆虫—杆状病毒表达系统成功的表达了改良的人乳头瘤病毒16型L1蛋白,并证实其具有良好的免疫原性;与现有VLP纯化方法相比,利用Ni-NTA树脂柱纯化蛋白,既省时省力,能降低纯化成本;所表达蛋白可在体外组装成VLP,具有良好的构象依赖性、免疫原性和抗原性,证明带有六个组氨酸的L1蛋白并不影响VLP的组装;经反复实验证明,所得L1蛋白稳定性很高,可长期保存于—20℃,这一制备HPV16 VLP方法的成功为在发展中国家开发VLP疫苗提供了可能;最后所制备的VLP也为检测其它HPV16疫苗及开发HPV16诊断芯片提供了必要的试剂;这一表达纯化系统的建立也为制备HPV其它类型的疫苗提供了借鉴.首次构建了具有预防及治疗双重作用的HPV16DNA疫苗的L1-E6、L1-E7融合蛋白表达质粒,并证实其可在体外表达融合蛋白;为今后进行HPV16DNA疫苗动物实验和临床试验研究做好准备.首次选用减毒志贺氏杆菌sc602和sh120为载体表达HPV16 L1蛋白,建立了以减毒志贺氏杆菌为载体的HPV16活工程菌,并经证实具有抗原性,为进一步制备可增强阴道粘膜免疫的预防性HPV重组活疫苗奠定了基础.
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