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目的： 1、观察不同分期的糖尿病肾病(DKD)患者中医证候特点及证型分布，并分析DKD中医证候与实验室指标的相关性，为提高DKD中医辨证精准水平提供相关依据; 2、探讨小檗碱对糖基化终末产物和高糖诱导下足细胞损伤及骨架蛋白的影响及机制。 方法： 1、临床研究:筛选糖尿病肾病患者134例，收集一般资料（性别、年龄、身高、体重，计算体重指数、血压），检测尿常规、24小时尿蛋白定量、尿微量白蛋白/肌酐、血常规、血糖控制指标（空腹血糖、餐后2小时血糖、糖化血红蛋白）、肾功能指标（血肌酐、尿素氮、胱抑素C、估算肾小球滤过滤）、血脂指标（总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白），根据24小时尿蛋白定量及肾小球滤过率将患者分为3期:即早期DKD(尿蛋白＜0.5g/d和/或肾小球滤过率eGFR＞60ml/min)、进展期DKD（尿蛋白＞0.5g/d和eGFR60～15ml/min）、终末期DKD(eGFR＜15ml/min)。观察各期患者主证和兼证，通过描述性统计研究方法，对不同分期DKD患者的中医证候特点及证型分布规律进行分析;记录客观生化指标，统计证候学积分，进一步探讨影响DKD患者病情进展的危险因素。 2、实验研究:以条件永生性人足细胞作为研究对象，于含10％胎牛血清及100U/Lr干扰素的RPMI1640培养液中进行体外培养，细胞增殖并诱导分化后进行分组处理。分别用高糖(30mM)、AGE(100μg/mL)、小檗碱(10μM)处理48h后，倒置显微镜观察足细胞形态变化;激光共聚焦显微镜观察细胞骨架蛋白F-actin、G-actin改变;原位细胞免疫组化检测cspase-3、nephrin表达。 结果： 1、临床研究结果:早期DKD处于微量蛋白尿期（24小时尿蛋白定量0.25±0.13g），肾功能轻度受损（eGFR=72.65.88±21.36ml/min），进展期出现大量蛋白尿（24小时尿蛋白定量2.96±2.70g），肾功能处于CKD3B期（eGFR=42.13±14.18ml/min）;终末期则以肾功能严重衰竭为主(eGFR＜10ml/min)。三期中医证候分布各有特点:早期DKD以气阴两虚证为主，兼杂血瘀证;进展期DKD以脾肾气虚证为主，兼证以血瘀证和水湿证多见;终末期DKD以脾肾阳虚证为主，并呈血瘀、水湿、痰浊兼杂重症。随着DKD临床蛋白尿水平升高和肾功能损害加剧，中医临床症状积分也随之增多。餐后血糖、低密度脂蛋白胆固醇、血肌酐是影响DKD病情进展的主要危险因素。 2、实验研究结果:倒置显微镜下观察显示，经高糖刺激48h后，足细胞突出减少，细胞形态发生改变，由树枝分叉状变为鹅卵石状，部分细胞出现脱落，高糖+AGE组足细胞形态与高糖组相似，经小檗碱干预后，细胞形态改变较少见，多数细胞仍呈树枝分叉状贴壁生长。共聚焦显微镜下观察显示，正常糖培养组，足细胞F-actin张力纤维丝密集排列，G-actin呈均匀分布，细胞骨架清晰，高糖及AGE作用下，足细胞F-actin出现重排，G-actin易位，小檗碱干预后有所恢复。免疫组化结果显示，对照组及高糖组几乎未见capase-3阳性表达，但高糖+AGE组，capase-3呈阳性表达，nephrin表达显著降低。小檗碱作用后，capase-3的水平有一定下降，同时提高nephrin水平。 结论： 1、随着DKD临床蛋白尿水平升高和肾功能损害加剧，不同DKD分期的中医症状出现频次增加、严重程度加剧，辨证分型各有特点。 2、随着DKD临床蛋白尿水平升高和肾功能损害加剧，中医临床症状积分也随之增多。餐后血糖、低密度脂蛋白胆固醇、血肌酐是影响DKD病情进展及患者预后的主要危险因素。 3、持续的高糖和AGE可引起足细胞骨架蛋白F-actin、G-actin重构及分布异常，并诱导足细胞凋亡，小檗碱能改善高糖和AGE引起的足细胞骨架蛋白损伤，并抑制足细胞的凋亡，影响nephrin的表达。