苯脲类除草剂酶联免疫检测方法的研究

来源 :天津科技大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:by_huang
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本论文制备了识别苯脲类除草剂的单克隆抗体,建立了一种检测苯脲类除草剂的酶联免疫吸附检测方法(Enzyme-linked Immunosorbent Assay, ELISA)。通过计算机辅助分子模拟(Computer-Aided Molecular Modeling, CAMM)及定量结构-效应关系(Quantitative Structure-Activity Relationship, QSAR)的方法,系统研究了抗原对抗体识别的影响。将半抗原与牛血清蛋白(Bovine Serum Albumin, BSA)偶联,获得免疫原免疫小鼠。将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合获得杂交瘤细胞。通过有限稀释克隆法克隆并筛选得到最优的单克隆抗体。优化包被量、抗体量、酶标二抗量、封闭液等条件,建立了间接竞争ELISA方法,可同时检测12种苯脲类除草剂。针对不同待测物,该方法的灵敏度为1.7-920.7ng/mL,检出限为0.4-76.9ng/mL。对海河水进行预处理,并使用该ELISA方法检测其中添加的苯脲类除草剂,回收率在77.05-121.71%之间,说明该方法准确可靠。使用CAMM结合QSAR方法分析了苯脲类除草剂分子结构、亚结构及其性质对抗体识别的影响,发现:(1)该小分子抗原的疏水性对抗体识别有极为重要的影响,且其贡献与抗体识别效率呈二次相关:(2)抗原分子的最低未占据分子轨道能量ELUMO对抗体识别有重要影响;(3)通常认为,用于连接载体蛋白的基团较少暴露在免疫反应环境中,故对抗体识别贡献不大,所以在免疫分析中抗原上同样位置的基团对抗原抗体反应也无影响,但本研究证实苯脲类除草剂分子的该基团对抗体识别有重大的影响。本文首次将Hansch方程、亚结构水平的二维QSAR和分子全息QSAR引入到抗原抗体反应的研究中。本研究证实,CAMM结合QSAR的研究方法是进一步探究抗体识别机理的有力工具。
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