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目的:1、研究中国人群散发型肌萎缩侧索硬化症患者中ARHGEF28基因突变/变异谱,并结合发现突变患者的临床特点,分析其基因型与临床表型的关系。2、针对发现的突变预测产物蛋白的结构变化,为研究该基因突变与中国人群中散发肌萎缩侧索硬化症的关系提供基础。方法:1、采用PCR-Sanger DNA测序技术,对82例临床诊断为散发型肌萎缩侧索硬化(sALS)患者和97名正常对照的ARHGEF28基因所有36个外显子进行突变筛查。检出的突变/变异采用基因数据库(Ensemble,ExAC,COSMIC等)进行检索和比对。对常见变异(MAF>5%)之等位基因频率进行病例-对照分析;对少见或罕见变异(MAF<3%)者进行基因水平富集(Enrichment)分析。2、结合基因检测结果对发现突变的患者进行临床特点分析。3、预测突变导致蛋白产物的变化。结果:1、在82例中国人群sALS和97例正常对照中,共检21个已报道单核苷酸多态(SNP),其中同义变异9个,错义变异12个。SNP分布于2、5、6、10、11-13、18、19、21、23、24、28、30、31及34-36号外显子。病例-对照对比分析发现,位于11号外显子的rs2973571之C等位基因在ALS患者中的频率(9/162=5.56%)显著高于对照组(2/194=1.03%)(OR=5.65,95%CI:1.20-26.52,P=0.01)。2、在1例sALS患者中,发现其34号外显子有一个致病性无义突变(c.4724C>A,p.Ser1575X),检索基因数据库提示为国际首报新突变位点。3、罕见变异(rs2973571,rs182944481,rs765579579)在中国人sALS患者中存在聚集现象。4、携带高风险变异rs2973571的患者在临床上以肢体起病为主,其临床特点上与非携带组无统计学差异。5、预测新检出的突变可能导致该基因编码的蛋白缩短,使微管蛋白结合区90%的序列丢失。结论:1.本研究在国内外首次对散发型肌萎缩侧索硬化患者中进行了ARHGEF28基因的系统突变筛查,检测出34号外显子CC>CA(c.4724 C>A,p.Ser1575X)无义突变。该突变位于该蛋白的重要功能区,可导致编码蛋白重要区域缺失及功能变化。同时发现多个高风险变异(rs2973571,rs182944481,rs765579579)与ALS明确相关。这首次为ARHGEF28基因与sALS的关联性提供了直接的遗传学证据。2.本次发现的突变和高风险变异可望用于sALS的风险预测和基因检测,并为进一步研究该基因参与ALS的发病机制提供了全新的思路。3.本研究部分受样本量小的影响,未发现ARHGEF28基因突变/变异与ALS临床表型的关联性。