论文部分内容阅读
药对又称“对药”，是指临床上常用且相对固定的中药配伍形式，是方剂最小的组方单位。但是其科学性和作用机制尚未完全明确。目前药对研究已经在配伍前后化学成分的变化、药理、药效、药代动力学研究等各个方面都取得了一定进展，但是药对的研究还不够深入系统，特别是药对配伍规律的研究尚无新的突破点。我们认为药物代谢性相互作用是药对配伍规律的重要机制之一。由于栀子、连翘为临床常用清热解毒中药，常在一起作为药对配伍使用，且栀子、连翘单药目前在药物化学及药理方面已经有大量的文献报道，但是有关栀子，连翘药对的研究未见报道，因此本课题拟选择该药对研究其配伍规律与作用机制，研究内容包括：配伍前后化学成分变化、药效学变化和主要指标成分药代动力学参数的变化等方面。 第一章栀子-连翘药对化学成分变化研究 1.栀子-连翘药对配伍前后主要指标成分的变化 目的：建立同时检测栀子-连翘药对主要有效成分的HPLC方法，研究栀子-连翘药对配伍前后主要化学成分栀子苷、连翘苷的变化情况。方法：水煎煮制备栀子、连翘、栀子，连翘药对提取物，测定栀子、连翘单味药提取液，栀子-连翘药对提取液中栀子苷和连翘苷的含量。结果：栀子苷、连翘苷提取量在单药煎液与药对煎液中变化不明显，单味药与药对提取液比较，栀子苷为24.43∶23.86，连翘苷为2.64∶2.63。结论：栀子-连翘药对配伍前后主要指标性成分栀子苷、连翘苷未发生明显变化。 2.栀子-连翘药对配伍前后指纹图谱研究 目的：建立栀子、连翘、栀子-连翘药对HPLC指纹图谱，研究栀子-连翘药对配伍前后指纹图谱变化情况。方法：水煎煮制备栀子、连翘及栀子-连翘药对提取物，采用高效液相色谱法测定栀子、连翘单味药提取液及栀子-连翘药对提取液得到指纹图谱信息，使用中药指纹图谱软件处理(2004A版)。结果：配伍后药对指纹图谱与栀子、连翘单药指纹图谱比较，药对指纹图谱的主要贡献来自连翘，二者有极好的相似度；药对指纹图谱与单药指纹图谱比较，基本为栀子、连翘两单味药特征峰的加和，没有明显新色谱峰的增加，配伍后仅特征峰2面积显著增加(P<0.05)。结论：栀子-连翘药对配伍前后主要指标性成分未发生显著变化，栀子连翘药对配伍前后指纹图谱未发生显著变化，提示栀子-连翘配伍后指纹图谱没有发生明显改变。 第二章栀子-连翘药对配伍前后主要药效学变化研究 1.栀子-连翘药对配伍前后对发热模型大鼠体温的影响 目的：通过观察栀子.连翘药对配伍前后对发热大鼠的解热、抗炎等方面的影响，证明其配伍可以显著增强解热、抗炎作用，阐述其配伍药效学可能机制。方法：制备栀子、连翘、栀子.连翘药对水提取物冻干粉，临用时用水溶解灌胃后给药。将SD大鼠随机分组，设正常组、模型组、阳性药对照组及中药给药组，给药组分栀子、连翘单药给药、栀子-连翘药对给药组。中药提取物溶液为10mL·kg-1(相当于单味药生药量3g·kg-1)，阳性对照组给药10mL·kg-1，空白组、模型组给予等量的生理盐水灌胃。除正常大鼠外，各组大鼠采用背部皮下注射15％的干酵母悬液10mL·kg-1，建立大鼠发热模型。电子体温计记录大鼠0、1、4、5、6、7、8小时体温，观察配伍前后对发热大鼠的体温变化。结果：栀子、连翘及其药对配伍均具有一定的降低大鼠体温的作用，二药配伍后降温效果优于单用栀子或连翘；栀子-连翘药对能够降低发热大鼠的体温(P<0.05)，对正常大鼠的体温无明显影响。结论：栀子与连翘配伍在大鼠发热模型上的降温趋势优于单药但无显著性差异。 2.栀子-连翘药对配伍前后对发热模型大鼠胆汁分泌的影响 目的：通过观察栀子-连翘药对配伍前后对发热大鼠胆汁分泌的影响，探索配伍可能对胆汁分泌的作用，阐述其配伍的可能清热利胆药效学机制。方法：制备栀子、栀子-连翘药对水提取物冻干粉，临用时水溶解灌胃给药，中药提取物溶液为10mL·kg-1(相当于单味药生药量3g·kg-1)。将SD大鼠随机分组，给药组分栀子、栀子-连翘药对给药组。2组大鼠麻醉后胆管插管，采用背部皮下注射15％的干酵母悬液10mL·kg-1，建立大鼠发热模型。给药后收集1-1、1-2、2-4、4-6、6-8、8-12、12-24小时胆汁，观察配伍前后发热大鼠胆汁量的变化。结果：栀子与连翘配伍具有一定的增强发热大鼠胆汁分泌的作用，二药配伍后胆汁分泌效果明显优于单用栀子(P<0.01)。结论：栀子与连翘配伍在增加胆汁分泌方面具有显著的增加，说明该药对配伍后利胆作用增强。 第三章栀子-连翘药对配伍前后主要化学成分药代动力学变化研究 1.药对配伍前后正常大鼠的连翘药代动力学变化特征 目的：通过比较连翘与栀子-连翘药对配伍前后灌胃给药正常大鼠体内主要化学成分连翘苷、连翘酯苷药代动力学参数的差异，阐述其配伍规律与作用机制。方法：将SD大鼠随机分为连翘组、栀子-连翘药对组。将连翘及药对水提物分别灌胃，中药提取物溶液为10mL·kg-1(相当于单味药生药量3g·kg-1)，LC-MS-MS分析0、0.25、0.5、1、2、3、4、6、8、12、24小时血清样品。结果：连翘及栀子-连翘药对配伍后连翘苷的Cmax分别为(12.67±8.78)、(18.97±11.56)μg·L-1，t1/2分别为(1.82±0.79)、(1.49±0.33)h，AUC(0-t)分别为(42.58±39.21)、(44.77±18.28)μg·L-1·h；连翘、栀子-连翘药对配伍前后连翘酯苷的Cmax分别为(30.08±13.29)、(24.43±8.76)μg·L-1，t1/2分别为(1.93±0.19)、(1.65±0.56)h，AUC(0-t)分别为(98.95±57.09)、(86.44±15.15)μg·L-1·h。与连翘组相比，配伍后连翘苷Cmax和AUCc(0-t)升高；与连翘组相比，配伍后连翘酯苷Cmax和AUC(0-t)降低，连翘苷与连翘酯苷的变化均没有显著差异(P>0.05)。结论：栀子-连翘药对配伍前后对正常大鼠体内主要化学成分连翘苷、连翘酯苷的药动学特征影响不显著，配伍栀子对连翘苷、连翘酯苷的生物利用度仅有轻微影响。 2.药对配伍前后正常大鼠的栀子药代动力学变化特征 目的：通过比较栀子-连翘药对配伍前后灌胃给药正常大鼠体内主要化学成分栀子苷、药代动力学参数的差异，阐述其配伍规律与作用机制。方法：将SD大鼠随机分为栀子组、栀子-连翘药对组。将栀子、药对水提物分别灌胃，中药提取物溶液为10mL·kg-1(相当于单味药生药量3g·kg-1)，LC-MS-MS分析0、0.25、0.5、1、2、3、4、6、8、12、24小时血清样品。结果：栀子及栀子-连翘药对配伍后栀子苷的Cmax分别为(566.55±248.47)、(567.75±230.16)μg·L-1，t1/2分别为(9.63±9.49)、(1.75±0.36)h，AUC(0-t)分别为(1666.44±572.70)、(2244.87±858.99)μg·L-1·h；与栀子组相比，配伍后栀子苷Cmax基本无变化，AUC(0-t)有升高趋势，但变化不显著(P>0.05)。结论：栀子-连翘药对配伍前后对正常大鼠体内主要化学成分栀子苷的药动学参数影响不显著。 3.药对配伍前后发热模型大鼠的连翘药代动力学变化特征 目的：通过比较连翘与栀子-连翘药对配伍前后灌胃给药发热模型大鼠体内主要化学成分连翘苷、连翘酯苷药代动力学参数的差异，阐述其配伍规律与作用机制。方法：将SD大鼠随机分为连翘组、栀子-连翘药对组。各组大鼠采用背部皮下注射15％的干酵母悬液10mL·kg·-1，建立大鼠发热模型。将连翘及药对水提物分别灌胃，中药提取物溶液为10mL·kg·-1(相当于单味药生药量3g·kg·1)，LC/MS/MS分析0、0.25、0.5、1、2、3、4、6、8、12、24小时血清样品。结果：连翘及栀子-连翘药对配伍后连翘苷的Cmax分别为(21.76±2.13)、(19.25±5.20)μg·L-1，t1/2分别为(1.57±0.68)、(0.95±0.42)h，AUC(0-t)分别为(67.82±6.59)、(40.66±5.29)μg·L-1·h；连翘、栀子-连翘药对配伍前后连翘酯苷的Cmax分别为(27.19±7.30、(27.83±7.64)μg·L-1，t1/2分别为(1.67±0.67)、(1.81±0.53)h，AUC(0-t)分别为(82.87±22.99)、(85.12±28.23)μg·L-1·h。与连翘组相比，配伍后连翘苷Cmax和AUC(0-t)降低；与连翘组相比，配伍后连翘酯苷Cmax和AUC(0-t)变化不明显。结论：栀子-连翘药对配伍前后对发热模型大鼠体内主要化学成分连翘苷、连翘酯苷的药动学有一定影响，配伍栀子后连翘苷生物利用度显著降低、连翘酯苷的生物利用度增加不明显。 4.药对配伍前后发热模型大鼠的栀子药代动力学变化特征 目的：通过比较栀子，连翘药对配伍前后灌胃给药发热模型大鼠体内主要化学成分栀子苷、药代动力学参数的差异，阐述其配伍规律。方法：将SD大鼠随机分为栀子组、栀子-连翘药对组。各组大鼠采用背部皮下注射15％的干酵母悬液10mL·kg-1，建立大鼠发热模型。将栀子、药对水提物分别灌胃，中药提取物溶液为10mL·kg-1(相当于单味药生药量3g·kg-1)，LC-MS-MS分析0、0.25、0.5、1、2、3、4、6、8、12、24小时血清样品。结果：栀子及栀子-连翘药对配伍后栀子苷的Cmax分别为(3672.68±1480.06)、(4940.74±1155.33)μL·kg-1，t1/2分别为(1.45±0.32)、(1.51±0.64)h，AUC(0-t)分别为(12757.6±5314.31)、(25384.59±5230，07)μL·kg-1；与栀子组相比，配伍后栀子苷Cmax和均AUC(0-t)均增加，其中AUC(0-t)升高非常显著(P<0.01)。结论：栀子-连翘药对配伍后可显著提高发热模型大鼠体内主要化学成分栀子苷的血药浓度，增加栀子苷的生物利用度，可能是栀子-连翘药对配伍增效的作用机制之一。 5.药对配伍前后模型大鼠的栀子胆汁排泄变化特征 目的：通过比较栀子-连翘药对配伍前后灌胃给药大鼠主要化学成分栀子苷胆汁排泄动力学的差异，阐述其配伍规律与作用机制。方法：将SD大鼠随机分为栀子组、栀子，连翘药对组。各组大鼠采用背部皮下注射15％的干酵母悬液10mL·kg-1，建立大鼠发热模型。将栀子、药对水提物分别灌胃，中药提取物溶液为10mL·kg-1(相当于单味药生药量3g·kg-1)，收集0-1、1-2、2-4、4-6、6-8、8-12、12-24小时各时间段胆汁样品，LC-MS-MS分析。结果：栀子及栀子-连翘药对配伍后栀子苷24小时累积排泄量分别为(403.18±323，59)、(995.52±1174.80)μg·L-1·h；与栀子组相比，配伍后栀子苷累积胆汁排泄量增加非常显著(P<0.01)。结论：配伍连翘可以显著增加模型大鼠栀子苷的胆汁排泄，可能是栀子，连翘药对配伍增强清热利胆的作用机制之一。 结论：栀子-连翘药对配伍后主要化学成分未见显著变化，可能不是该药对配伍规律的主要作用机制；栀子-连翘药对配伍后栀子苷在模型大鼠上药代动力学参数发生显著变化，可能是该药对清热抗炎主要机制之一；栀子-连翘药对配伍后栀子苷在模型大鼠上胆汁排泄增加可能是该药对利胆作用的主要机制之一。