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研究目的: 多药抗药性(Multidrug resistance，MDR)是肿瘤化疗失败的主要原因，也是肿瘤化疗领域急需解决的难题。多药抗药性的形成机理复杂，但目前研究均不能解释为何病人在短时间内迅速获得耐药性。在MDR产生的机理中，最常见和最重要的原因就是ATP结合盒转运蛋白家族(ATP Binding Cassette Transporters，ABC转运泵)的过度表达。ABC转运蛋白广泛存在于各种生物体细胞中，其利用ATP的结合和水解供能进行底物的跨膜转运。ABCB1(P-糖蛋白/P-gp)为ABC转运蛋白家族最重要的转运泵之一，它们可利用ATP水解的能量，将抗癌药物泵出细胞外，使抗癌药物在肿瘤细胞中的浓度减少，从而产生抗药性。目前，大量的肿瘤细胞被发现高表达ABCB1，如乳腺癌、肝癌、胃癌、白血病细胞等。其中部分肿瘤组织本身可从其来源的正常组织中遗传到高表达的ABCB1表达，从而导致原发性耐药;而部分肿瘤细胞在药物的长期选择压力下可通过mRNA逐步表达ABCB1，呈现获得性耐药。2005年，Levchenko等首先提出一种新的“非遗传”获得性MDR机制，即功能性ABCB1可从表达阳性的细胞转移到表达阴性的细胞，使阴性细胞形成MDR表型。而且这种获得性MDR机制的形成无需药物的选择压力。但目前为止，这种非遗传性的MDR机制研究并不清楚，化疗药物对“非遗传性”的MDR机制形成的影响也未可知。 研究方法: 收集初次化疗的非小细胞肺癌患者化疗前后的外周血血液标本，用Ficoll-Hypaque密度梯度离心分离其单核细胞;慢病毒稳定转染构建GFP标记的敏感细胞株;激光共聚焦免疫荧光观察ABCB1的胞间转移;流式细胞术测定ABCB1的胞间转移率;用MoFloTM XDP高速流式细胞仪进行获得ABCB1转移细胞(Aq-MDR)的分选;MTT法测定药物的细胞毒作用;高速离心法收集分离膜微粒;裸鼠移植瘤模型研究体内ABCB1的胞间转移;Western blotting检测蛋白的表达水平;RT-PCR检测基因的mRNA表达水平。 研究结果: 1.无ABCB1表达的敏感细胞与过度表达ABCB1/P-gp的耐药肿瘤细胞共培养后，敏感肿瘤细胞对其ABCB1的底物药物紫杉醇、阿霉素、长春新碱等表现出不同程度的药物抵抗性。 2.ABCB1蛋白可能通过膜微粒的方式从耐药细胞转移至敏感肿瘤细胞。发生ABCB1转移的敏感细胞（统称为Aq-MDR细胞）获得明显的ABCB1蛋白表达，但无mRNA表达。 3.化疗药物长春新碱VCR、阿霉素Dox，顺铂等均可明显促进ABCB1的细胞间转移。 4.获得ABCB1转移的敏感细胞(Aq-MDR)对Dox及VCR的IC50均明显高于敏感的KB细胞，且细胞内的罗丹明123或阿霉素积累水平明显低于敏感的KB细胞。但随着培养时间的延长，Aq-MDR细胞内的罗丹明123或阿霉素积累水平逐渐升高。而且对阿霉素的IC50随培养时间的延长逐渐降低。表明Aq-MDR细胞获得了“临时性的”耐药表型。 5.化疗药物VCR明显促进耐药细胞中含ABCB1蛋白的膜微粒的释放，这一过程可能与Rab8B的表达上调有关。 6.化疗药物VCR可能通过Rab5的下调促进MVs在敏感细胞中的再循环。 7.小窝蛋白的敲低对ABCB1的胞间转移率影响并不明显。而网格蛋白Clathrin及动力蛋白Dynamin2表达下调均明显降低ABCB1的胞间转移率。 8.KB-GFP与KBv200细胞混合后建立的裸鼠移植瘤模型中，部分KB-GFP获得ABCB1表达。KB-GFP与Kbv200细胞分别对侧植瘤后，部分KB-GFP也可获得ABCB1蛋白表达。表明ABCB1胞间转移可能在体内发生。而且化疗药物刺激明显提高其ABCB1胞间转移率。 9.部分非小细胞肺癌患者在初次化疗48h后其单核细胞ABCB1膜蛋白表达水平发生不同程度的升高。而ABCB1表达水平的瞬时升高明显影响病人的化疗预后。 研究结论: 1.膜微粒可介导ABCB1从耐药细胞转移至敏感肿瘤细胞，使敏感肿瘤细胞获得“临时性的”耐药表型。 2.化疗药物可体外促进ABCB1的细胞间转移。 3.化疗药物促进ABCB1的细胞间转移可能通过上调耐药细胞中Rab8B表达引起膜微粒释放增加及促进敏感细胞中Rab5调控的膜微粒再循环。 4.裸鼠移植瘤模型中，化疗刺激可促进ABCB1的细胞间转移。 5.ABCB1的细胞间转移可能与临床化疗预后显著相关。