论文部分内容阅读
中国杨树的栽培居世界首位。但单一品种的过度利用导致杨树虫害愈演愈烈。利用基因工程技术培育抗虫杨树新品种已迫在眉睫。本文选择转抗虫基因(Bt、CpTI)南林895杨为试验材料,开展了分子检测、抗虫性测定及生物安全性初步评估,为选育抗虫转基因杨树新品种提供了依据。主要研究结果如下:1.通过对基本培养基、激素组合、培养条件等筛选,改良了转基因南林895杨的组培繁殖体系。其中叶片诱导分化培养基为:MS+0.5mg/L 6-BA+0.002mg/LTDZ+0.1mg/L NAA,蔗糖30g/L,琼脂7.0g/L;芽增殖培养基:MS+0.2mg/L 6-BA+0.001mg/L TDZ+0.05mg/L NAA,蔗糖30g/L,琼脂7.0g/L;生根培养基:1/2MS+24g/L蔗糖。建立的组培体系提高了转基因杨树的组培繁殖效率:分化率由91%提高至100%,增值系数由11.6%提高至36.0%,为开展分子检测与抗虫转基因895杨生物学测定提供了基础;2.由于林木生长周期长,为跟踪转基因895杨的遗传稳定性,对继代培养达4年的转Bt基因895杨11个株系B2、B17、B4、B1、B21、B16、B6、B8、B12、B3、B5等进行了PCR检测,分析结果表明这批转基因895杨仍携带有外源目的基因,为选育抗虫转基因杨新品种提供了依据;3.本研究采用杨小舟蛾健康四龄幼虫进行田间试验转基因南林895杨10个株系B5、B7、B16、B2、B12、B4、B1、B17、B21、C4的抗虫性生物测定。结果表明,转基因植株表现出了不同程度的抗虫性。其中抗虫性较高的株系有B21、B1、B4、B17,幼虫平均校正死亡率(对照为0)分别达到25.6%、24.0%、15.0%、12.0%;转基因杨树叶片对幼虫的体重有显著抑制作用,其中B5、B4、C4、B21饲喂的幼虫平均相对体重均下降了50.0%以上;室内群体饲虫实验结果表明,B4、B1、B21植株对幼虫的化蛹率产生显著影响,化蛹率比对照下降30.0%以上,蛹重比对照下降33.3%以上B4、B1的羽化率均比对照下降了25.0%以上;4.植物的生物安全性问题越来越受到人们的关注。为了解转Bt基因杨树对土壤微生物的影响,本文对5个转抗虫基因植株B21、B1、B17、B4、C4与对照进行了根际土壤微生物可培养类群的分析。初步结果表明转基因杨树根际土壤微生物中细菌、真菌、放线菌与对照相比没有显著差异。