微囊藻毒素-LR对大鼠睾丸支持细胞氧化应激影响

• 作 者: 王钧
• 机 构: 郑州大学
• 出 处: 郑州大学
• 发表日期: 2010年期

微囊藻毒素(microcystins,MCs)是由水体中蓝藻类产生的具有生物活性的单环七肽化合物。1990年,科学家首次发现,MC进入肝细胞后,能强烈地抑制蛋白磷酸酶(PP1、PP2A)的活性,这是MC致毒的最重要的分子基础；1996年Pour等报道,巴西一家血液透析中心因使用含MCs污染的水作肾透析液,导致60例病人死亡。从此,因MCs污染所造成的野生动物、家畜、家禽等中毒、死亡的事件陆续有了很多报道。MCs的毒性、毒性机制以及它对人体健康的影响,成为研究的热点。　　
MCs从被发现以来,肝脏一直是其第一靶器官。近来有发现水产动物器官里,性腺是第2个靶器官,所以MCs可能具有生殖毒性。国内外目前关于MCs引起的生殖毒性研究报道很少,机制也不清楚。　　
目的:本课题组从事MCs毒性的相关研究,结果发现MC-LR可引起小鼠睾丸细胞DNA-蛋白质交联,导致生殖损伤。本研究是在先前的研究基础上,以体外分离原代培养的大鼠睾丸支持细胞为研究对象,使其暴露于不同浓度的MC-LR,研究氧化应激在大鼠生殖系统细胞损伤中的作用。以此探讨氧化应激机制在MCs造成的雄性生殖功能损伤中的作用,为进一步研究MCs对哺乳动物生殖毒性的影响提供理论依据。　　
方法：　　
1、分离纯化清洁级未成年雄性SD大鼠睾丸支持细胞,建立体外原代培养模型,用Feulgen染色进行鉴定。MTT法描述生长曲线。以浓度为0～15μg/L的MC-LR对支持细胞染毒24h,确定MC-LR对细胞活性的影响。　　
2、测定MC-LR对细胞内LDH、MDA、SOD、ROS的影响:用不同浓度(0、0.15μg/L、1.5μg/L、15μg/L)MC-LR处理支持细胞,分别在6、12、24h后,提取细胞,用DCFH-DA法测定ROS,比色法测定LDH,TBA法测定MDA,羟胺法测定SOD。　　
3、统计学分析:运用SPSS12.0统计软件的单因素方差分析(analysis ofvariance,ANOVA)对数据进行统计学分析(检验水准α=0.05)　　
结果：　　
1、本次试验分离培养的支持细胞体外生长良好,细胞纯度较高,可以用于体外实验研究。不同浓度的MC-LR染毒体外培养第4d的支持细胞24h后,结果发现MC-LR在0～15μg/L浓度范围时,细胞存活率无明显影响。　　
2、本次研究发现,MC-LR作用于支持细胞后6～24h,.各处理组的细胞内剂量、时间依赖性ROS均有所增加,12h和24h时高剂量组与对照组相比具有统计学意义(P＜0.05)。各处理组的细胞内剂量、时间依赖的LDH漏出率改变无统计学意义(P＞0.05)。此次不同的染毒时间及各染毒剂量组的细胞中MDA含量变化与对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05)。与对照组相比24h中等剂量和高剂量SOD活性降低,差异有统计学意义(P＜0.05)。　　
结论：　　
1、MC-LR在0～15μg/L浓度范围内对大鼠睾丸支持细胞的存活率无明显影响。　　
2、MC-LR可以导致体外培养的大鼠睾丸支持细胞氧化应激增强,但未观察到细胞膜通透性增大和脂质过氧化损伤。