【摘 要】
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该研究采用T4噬菌体SOC位点高拷贝数表面蛋白展示系统对IBD变异株GZ902的VP2蛋白进行表达,将VP2基因展示在T4噬菌体表面;获得的重组噬菌体有良好的免疫原性.以pBssk-VP2-GZ90
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该研究采用T4噬菌体SOC位点高拷贝数表面蛋白展示系统对IBD变异株GZ902的VP2蛋白进行表达,将VP2基因展示在T4噬菌体表面;获得的重组噬菌体有良好的免疫原性.以pBssk-VP2-GZ902为模板,采用PCR技术扩增出目的基因VP2-GZ902,大小为1350bp.将VP2-GZ902基因插入表达质粒pSOC的EcoR Ⅰ酶切位点,获得重组质粒pSOC-VP2-GZ902.将该重组质粒转入到大肠杆菌BL-21(DE3)中,在IPTG诱导下进行表达,SDS-PAGE检测结果显示,在大约4.9×10<4>处有一条特异性条带.Western Blot检测结果表明,大肠杆菌中表达的重组蛋白能够与IBDV阳性血清发生特异性结合,说明VP2基因能够在pSOC质粒中进行表达.将VP2-GZ902基因克隆到整合质粒pR的EcoR Ⅰ位点,获得重组质粒pR-VP2-GZ902.用重组质粒转化E-coli E2感受态细菌,将其与SOC基因缺失的溶菌酶依赖株ФT4-Z1进行同源重组,在缺乏溶菌酶的培养基上筛选转化的重组噬菌体.挑取噬菌斑用特异性引物VP2-S/VP2-A进行PCR鉴定,扩增出1350bp的条带,证明重组噬菌体中含有目的基因VP2-GZ902.该实验应用T4噬菌体表达系统表达了IBD变异株GZ902的VP2蛋白,并首次用获得的重组噬菌体为包被抗原初步建立了检测IBD抗体的ELISA方法.为研制IBDV变异株基因工程疫苗和开发诊断试剂盒奠定了基础.
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