论文部分内容阅读
目的：人表皮生长因子(hEGF)的高效表达和兔抗人羧酸酯酶1(CES1)多克隆抗体(pAb)的制备与鉴定。
方法：将重组质粒pGEX-4T-1-hEGF、pGEX-4T-1-CES1和pET-32a-CES1转化入大肠杆菌BL21并筛选得到工程菌株，以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导目的蛋白表达；亲和层析纯化EGF，MTT法测定EGF的促细胞增殖活性；以CES1-GST融合蛋白作为免疫原制备兔pAb，辛酸-硫酸铵法纯化抗体，采用Western blot和免疫组化鉴定抗体的特异性。
结果：成功表达hEGF蛋白，部分表达产物为可溶性的，部分形成包涵体，菌体裂解上清液中hEGF蛋白经亲和层析纯化后纯度达98%，复性后的hEGF具有很好的促细胞生长活性；CES1-GST和CES1-His融合蛋白均在大肠杆菌中以包涵体形式大量表达，兔抗人CES1 pAb效价为1：64000：Western blot鉴定表明，该抗体可识别重组人CES1蛋白，也可特异地识别人肝微粒体中的CES1亚基；免疫组织化学鉴定显示该抗体可特异性识别正常肝组织中的CES1蛋白。
结论：成功表达了重组人表皮生长因子，其表达产物具有很好的促细胞增殖活性；成功地制备了兔抗人CES1 pAb，该抗体可应用于ELISA、Western blot、免疫组化等实验，为进一步探索CES1的功能提供了一种有效的研究工具。