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目的：研究当归六黄汤发挥免疫抑制作用的分子机制。观察当归六黄汤在体外对T、B淋巴细胞增殖情况的影响，确定其是否具有体外免疫抑制作用；通过体外培养树突状细胞（DC），测定其表型（CD11c、CD86、MHC-Ⅱ）及功能（MLR反应）变化，明确当归六黄汤对DC细胞成熟的影响和对DC细胞功能的作用；通过当归六黄汤在体外对正常HepG2细胞葡萄糖吸收率的影响，明确其是否具有体外降糖作用；通过观察当归六黄汤抗1型糖尿病（T1DM）小鼠的作用，明确其抗T1DM作用及可能的分子机制。 方法：（1）采用颈椎脱臼法处死小鼠，无菌取脾，制备单个脾细胞悬液，加入不同浓度的当归六黄汤，同时设孢素A及霉酚酸酯作为阳性对照组，于48h后，采用Cell Counting Kit（CCK8）法检测当归六黄汤在不同浓度时，对T、B细胞的抑制率。体外诱导小鼠骨髓树突状细胞，选择抑制淋巴细胞增殖最佳的药物浓度，与培养的不同时间加入细胞中共同培养。第7d检测当归六黄汤对树突状细胞表面抗原MHC-Ⅱ、共刺激因子CD86表达的影响，CCK8法检测当归六黄汤处理的DC在不同刺激比时对同种异体脾淋巴细胞增殖活力的影响。体外培养正常的HepG2细胞，用葡萄糖测定试剂盒检测培养基中葡萄糖含量，确定药物对HepG2细胞葡萄糖吸收率的影响。 （2）各组小鼠腹腔注射链脲佐菌素（STZ）溶液，剂量为40mg/kg，其中STZ溶液连续（用枸橼酸缓冲溶液配制）注射5天，每周测一次血糖，小鼠血糖≥16.7mmol/l，即判断为1型糖尿病模型建立成功。造模成功后小鼠随机分为5组：模型对照组、空白对照组、当归六黄汤高剂量组（96g/kg）、当归六黄汤中剂量组（48g/kg）、当归六黄汤低剂量组（24g/kg），每组8只。小鼠于建模前每日灌胃给予不同剂量的当归六黄汤，连续4w。空白对照组和模型对照组灌胃给予等量的生理盐水（NS）。每周测定小鼠血糖、体重。末次给药后处死全部小鼠，取小鼠胰腺于10％中性甲醛溶液中固定，HE染色用于组织病理学检查，观察胰腺中炎性细胞的浸润和胰岛的破坏程度。无菌取脾，制备脾淋巴细胞悬液，观察各组小鼠脾淋巴细胞增殖的活力。分离培养骨髓来源的DC，培养第7d时，一部分用流式细胞术（FACS）测定其表型（CD11c、CD86、MHC-Ⅱ）的变化，一部分DC进行混合淋巴细胞反应，检测小鼠DC细胞功能的变化。 结果：（1）体外免疫细胞实验结果显示，不同浓度六黄汤对脾脏T、B细胞淋巴细胞有不同的抑制率，尤其在1/4浓度时（0.375g/ml），对T、B细胞的抑制率最佳与阳性药物环孢素A及霉酚酸酯相当。因此，我们选择1/4浓度为当归六黄汤体外最适宜浓度；FACS结果显示，与对照组相比，当归六黄汤可显著降低DC表面MHC-Ⅱ的表达，对CD86的作用不明显，下调DC对同种异体脾淋巴细胞的刺激能力，且在5:1时作用最明显。体外降糖实验结果显示，当归六黄汤可增加HepG2细胞的葡萄糖摄取能力（p<0.05），并具有剂量依赖性，给药组葡萄糖的吸收率高于二甲双胍组。 （2）采用链脲佐菌素小剂量多次腹腔注射可建立1型糖尿病小鼠模型，小鼠表现为活动减弱、皮肤松弛、尿量显著增加，饮食摄水量显著增加。血糖数据显示，除造模后第六天和第十天给药各组血糖有波动外，其他时间当归六黄汤高剂量组（96g/kg）、中剂量组（48g/kg）血糖均低于模型对照组，其中高剂量组降糖效果更明显（p<0.05）。胰腺组织HE染色结果显示，与胰腺正常的空白对照组比较，模型对照组大多胰岛结构不完整，有明显的淋巴细胞浸润，残余少量胰岛细胞，给药组则多数胰岛结构保持完好，炎性细胞浸润较少，胰岛细胞清晰可见。在刀豆蛋白（ConA）诱导的脾脏T淋巴细胞增殖实验中，当归六黄汤组脾脏T淋巴细胞增殖能力低于模型组，其中中剂量具有显著性差异（p<0.01）。FACS结果显示，当归六黄汤呈剂量依赖性的降低DC细胞表面MHC-Ⅱ和CD86分子的表达。混合淋巴细胞反应结果显示，当归六黄汤组呈剂量依赖性的降低DC细胞对同种异体小鼠脾淋巴细胞的刺激能力。 结论：（1）当归六黄汤在体外可抑制脾脏T、B淋巴细胞的增殖，抑制DC细胞的表型和功能，使DC细胞处于未成熟状态，当归六黄汤在体外可增加HepG2细胞的葡萄糖摄取能力，提示该药具有体外免疫抑制和降糖作用。 （2）当归六黄汤具有抗1型糖尿病小鼠的作用，表现出较好的免疫抑制作用。可降低C57BL小鼠的血糖，降低DC细胞表面MHC-Ⅱ和CD86的表达，抑制小鼠DC细胞的刺激功能，抑制脾脏T淋巴细胞的增殖，改善胰岛组织的病变，提示可能通过诱导免疫耐受发挥作用。