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目的：在复制并深入探究内毒素所致的蓄血证大鼠模型的基础上，研究桃核承气汤对蓄血证大鼠模型的干预作用。通过桃核承气汤全方组(桃仁、大黄、桂枝、炙甘草、芒硝)及调胃组(大黄、芒硝、炙甘草)、调桃组(桃仁、大黄、炙甘草)、调桂组(大黄、桂枝、炙甘草、芒硝)、桃桂组((桃仁、大黄、桂枝)等拆方组的药效学及作用机制的研究结果探讨分析桃核承气汤及其拆方组与蓄血证大鼠模型的逻辑关系及方证特点。 方法 方法一：根据Shwartzman反应原理，间隔24h大鼠尾静脉注射内毒素(LPS)各50μg/kg，复制蓄血证实验大鼠模型。取体温合格(37.8-38.7℃)雄性大鼠16只，随机分为两组，各组于2次注入LPS或生理盐水后的0.5h，1h，1.5h，2h，2.5h，3h测量大鼠的肛温；雄性SD大鼠40只，随机分为5组，即正常组和模型组(0.5h组，1h组，2h组，3h组)。在第2次给予LPS后0.5h，1h，2h，3h腹主动脉取血4mL(EDTA抗凝)检测全血粘度及血浆粘度；雄性SD大鼠24只，随机分为2组，即正常组和模型组。在第2次给予LPS后大鼠分0-1h，1-2h，2-3h时段，每个时段取血5次。每个时段用4只大鼠进行颈动脉插管取血5次，每次取0.9mL，加入枸橼酸钠100μL抗凝。分离血浆测定PT，TT。观察各组各时间点PT，TT值的变化情况。 方法二：观察桃核承气汤对蓄血证大鼠模型凝血时间PT，TT的影响。雄性SD大鼠72只(300-350g)设置正常组、桃核承气汤10g/kg(注射给与生理盐水)、LPS模型组，桃核承气汤20g/kg、10g/kg、5g/kg剂量组，每组各12只大鼠(300-350g)。各组大鼠连续给药3天，末次给药后0.5h进行造模的第2次注射。大鼠分0-1h，1-2h，2-3h时段，每个时段取血5次。每个时段用4只大鼠进行颈动脉插管取血5次，每次取0.9mL，加入枸橼酸钠100μL抗凝。分离血浆测定PT，TT。观察各组各时间点PT，TT值的变化情况。 方法三：桃核承气汤及其拆方组分对蓄血证动物模型作用机制研究。雄性SD大鼠(300-350g)56只实验分为7个组：全方组(10g/kg)，调胃组(5.7g/kg)，调桃组(8.6g/kg)，调桂组(7.1g/kg)，桃桂组(4.3g/kg)，模型组，正常组。各组均灌胃给予受试药物或生理盐水3次。给药及造模结束后，腹主动脉取血8mL，4mL分离血清，4mL分离血浆保存于-80℃冰箱。Griess法检测NO，ELISA检测t-PA，PAI-1，TNF-α，IL-1，IL-6，IL-4，IL-10，放免法测定ET-1，6-keto-F1α，TXB2，试剂盒法测SOD、MDA。 结果 1.模型大鼠在“热毒”LPS作用下，有外观热象表现，并出现血液粘度增高，凝血时间缩短等现象。在血清中炎性分子分泌紊乱，NO大量表达，MDA含量升高，SOD活性降低，对血管内皮细胞、血细胞、血小板等有氧化破坏作用，从而导致血液的凝集反应。模型大鼠血清或血浆中出现紊乱的炎性因子，过氧化状态为“热”的表现，纤溶系统被抑制，微血管处于舒张麻痹状态为“瘀”的表现。这种“因热致瘀，热瘀互结”的表现与中医的蓄血证有一致性。提示蓄血证大鼠模型复制成功。对造模后不同时间点的全血粘度及血浆粘度值比较及不同时间点PT，TT值的变化情况进行分析后发现，造模后2h是模型大鼠达到高凝期的最佳时间点。 2.研究桃核承气汤各剂量组、模型组、未造模的桃核承气汤中剂量组从造模结束开始后3h内，大鼠血浆中PT，TT随时间的变化规律。与正常组相比，模型组大鼠血浆的PT，TT值逐渐缩短，在120min时段左右达到最低点(P<0.01)，以后又逐渐延长。桃核承气汤各剂量组的PT，TT值下降不明显，且三个剂量组之间量效关系不明显。不造模的桃核承气汤中剂量组PT，TT值随时间变化很小，与正常组比较无差异。 3.桃核承气汤及其拆方组对蓄血证动物模型作用机理研究 内毒素耐受导致模型组大鼠血清中促炎因子IL-1β，TNF-α，IFN-γ含量无明显升高。而IL-6含量略有降低。全方组及调桂组能升高IL-6含量(P<0.01)。调胃组能明显升高大鼠血清中的IFN-γ含量。 与正常组比较，模型组大鼠的IL-4含量下降，IL-10含量明显上升。与模型组比较，除桃桂组外各组的IL-4值明显升高(P<0.01)。与模型组比较，调胃组及桃桂组不能降低IL-10，调桃组、调桂组能降低IL-10，全方组降低IL-10值的能力最强(P<0.01)。 桃核承气汤全方组对促炎因子IL-1β，TNF-α，IFN-γ，IL-6，抗炎因子IL-4，IL-10有调节作用，能使失衡的因子向正常组水平恢复。 模型组大鼠血清中SOD活性降低(低于正常组P<0.01)，过氧化反应代谢产物MDA大量增加(高于正常组P<0.01)。与模型组比较，全方组与调胃组，调桃组，调桂组均能明显升高SOD值(P<0.01)，降低MDA值(P<0.01)。桃桂组不能降低MDA值和升高SOD值。 模型大鼠血清中的t-PA含量值下降，PAI-1值上升，t-PA/PAI-1比值下降(与正常组比较P<0.01)。全方组能够降低PAI-1值，升高t-PA/PAI-1比值。调胃组，调桃组，调桂组能明显升高t-PA含量值，降低PAI-1含量值(与模型组比较P<0.01)。而桃桂组不能降低PAI-1值，不能升高t-PA/PAI-1比值。 模型大鼠血浆中NO，6-Keto-PGF1α值上升，TXB2值下降(于正常组比较P<0.01)，6-Keto-PGF1α/TXB2值上升(于正常组比较P<0.05)。各给药组均能升高大鼠血浆中TXB2值，降低6-Keto-PGF1α/TXB2值，降低NO值(P<0.01)。其中调桂组表现最好。 结论： 1.采用间隔24h，两次尾静脉注入LPS50μg/kg复制出因热致瘀，热瘀互结的蓄血证大鼠模型。造模后2h左右，动物处于高凝期状态。2h左右是进行实验研究较好的时间点。 2.桃核承气汤全方高、中、低剂量组能抑制模型大鼠PT，TT时间缩短的趋势，其量效关系不明显。 3.桃核承气汤与蓄血证有方证相关性。蓄血证大鼠模型的成因及表现与中医的蓄血证有一致性。桃核承气汤干预蓄血证大鼠模型，对“热”和“瘀”的指标综合作用优于其它配伍组。 4.各拆方组中，调胃组对“热”和“瘀”两方面指标有很好的调节作用，在全方中处于药效核心地位。调桂组、调桃组在调节“热”和“瘀”两方面指标方面整体表现好于调胃组。调桂组在调节“瘀”的方面指标表现最好。桃桂组在调节“热”和“瘀”两方面指标作用最差。