荧光偏振免疫分析在食品药品中有害物质残留检测的应用研究

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近年来,食品安全事件频频爆发。三聚氰胺、瘦肉精、塑化剂、苏丹红、金黄色葡萄球菌、黄曲霉毒素等有害物质在食品中的非法添加或残留,对人们生活影响重大。本课题选取食品药品中非法添加或残留的两种常见有害物质--塑化剂邻苯二甲酸二乙酯及瘦肉精莱克多巴胺作为检测方法的研究对象。   2011年5月起,台湾掀起历史罕见严重的食品安全风波,检测出大量食品被邻苯二甲酸酯(PAEs)塑化剂污染。一直以来,PAEs广泛应用于工业生产中,可起到助于塑料加工的作用,但是由于其对动物的生殖毒性,从未允许在食品中使用。该事件引起了中国各地及国际的广泛关注,各国政府都相继公布了相关法规标准。邻苯二甲酸二乙酯(DEP)是一种已经在多种食品及药品中被检测到非法添加或滥用的邻苯二甲酸酯类塑化剂。DEP在工业中用途极为广泛,并且药典中规定其可以作为药用辅料用于药品生产,但是我国药典对用量及安全性没有明确标准。   莱克多巴胺(Rac)是一种β-肾上腺素受体激动剂(β-兴奋剂),用作医药原料。美国FDA批准Rac仅在养猪生产中使用,可起增加胴体瘦肉率的作用,并规定其在猪肉食品中残留量应在50 ng/mL以下。在我国,农业部规定莱克多巴胺、克伦特罗等共16种瘦肉精禁止添加在饲料和动物饮用水中。但是,瘦肉精中毒事件屡次发生;进出口贸易中,也时常因为在猪肉中瘦肉精的残留量超标引起争端或经济损失。莱克多巴胺药物残留检测技术的开发具有很大的意义。   本研究建立了邻苯二甲酸二乙酯和莱克多巴胺的快速准确的荧光偏振免疫检测方法。该法无需分离,检测迅速,检测仪器简单,适合随身携带,有助于真正实现对大量样品的现场快速检测,将为食品药品安全监管提供有力的技术支持。   本论文中,对邻苯二甲酸二乙酯(DEP)进行了半抗原改造物及免疫抗原的合成及纯化,制备了DEP多克隆抗体,将抗原抗体反应原理及荧光标记技术相结合,建立起来快速灵敏特异性强的荧光偏振免疫分析法。在该检测法中,IC50=40.4 ng/mL,检测限(LOD,IC20)为6.0 ng/mL,线性范围是10 ng/mL~200ng/mL,相关系数R2=0.9994,与在食品药品中已被发现的另外6种塑化剂交叉反应率较低,均<5%。论文中已将该方法应用在饮用水、果汁饮料及肠溶胶囊三种实际体系中,平均回收率在86.51%和114.88%之间,平均变异系数在4.30%-17.03%之间,证明该法稳定可靠。本论文利用荧光素FITC标记莱克多巴胺,并结合莱克多巴胺单克隆抗体,建立起快速灵敏特异性好的荧光偏振免疫检测方法。IC50=2.03 ng/mL,满足检测标准的限量要求,线性范围是0.6 ng/mL~10ng/mL,相关系数R2=0.9992,对其它瘦肉精类药物交叉反应率极低,均<0.000002。以上结果表明该方法在食品安全莱克多巴胺残留检测方面具有很大应用前景。
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