【摘 要】
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目的:探讨miR-152靶向NCAM1调节肺腺癌顺铂敏感性,为临床上解决肿瘤耐药问题提供理论依据。方法:取对数生长期A549/DDP和A549细胞、A549/ADM细胞,加入不同浓度顺铂培养48h,采用MTT法检测顺铂对A549和A549/DDP细胞活性增殖的影响,运用Graphpad Prism 8.0软件计算IC50值。分别将miR-152-3p mimics/inhibitor和过表达NCA
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目的:探讨miR-152靶向NCAM1调节肺腺癌顺铂敏感性,为临床上解决肿瘤耐药问题提供理论依据。方法:取对数生长期A549/DDP和A549细胞、A549/ADM细胞,加入不同浓度顺铂培养48h,采用MTT法检测顺铂对A549和A549/DDP细胞活性增殖的影响,运用Graphpad Prism 8.0软件计算IC50值。分别将miR-152-3p mimics/inhibitor和过表达NCAM1转染进A549细胞中,将转染miR-152-3p mimics/inhibitor A549细胞分为（1）Control组（2）Mimics NC组（3）miR-152-3p mimics组（4）inhibitor NC组（5）miR-152-3p inhibitor组。同时将转染NCAM1细胞分为（1）Control组（2）OE-NC组（3）OE-NCAM1组,通过TRANSWEL实验检测各组细胞侵袭能力。通过基因干扰敲降NCAM1表达,将通过质粒转染A549和A549/DDP细胞分为（1）Control组（2）ox-NC组（3）ox-NCAM1组（4）sh RNA-NC组（5）sh-NCAM1组。通过MTT法检测肺腺癌对顺铂敏感性的改变;通过Quantitative-RT-PCR检测NCAM1基因m RNA的表达;Western Blot检测NCAM1蛋白表达水平。结果:通过增加顺铂浓度（分别取0、500、800、1000ng/ml）,在24小时检测3种不同细胞株增殖率我们可以发现:相较于其他2种细胞株而言,A549/DDP顺铂耐药株的细胞存活率最高;顺铂对A549/DDP顺铂耐药株细胞的增殖率明显高于A549细胞、A549/ADM阿霉素耐药株细胞,差异有统计学意义（P<0.05）。计算顺铂对A549在24h的IC50=38.49μg/m L。TRANSWELL实验通过检测酶标仪（490nm）OD值间接计数细胞,通过Image J计数侵袭细胞发现mimics NC组与miR-152-3P mimics组、miR-152-3P inhibitor组与inhibitor NC组比较,miR-152-3P mimics组和inhibitor NC组侵袭细胞数量明显减少,差异有统计学意义（P<0.001）。OE-NCAM1组与OE-NC组比较,OE-NCAM1组侵袭细胞数量明显增加,差异有统计学意义（P<0.001）。通过MTT法检测在不同浓度顺铂（1000、2000、3000、4000、5000ng/m L）中miR-152-3p、NCAM1对A549和A549/DDP细胞活性增殖能力,以Control组作为对照,miR-152-3p组中miR-152-3P Mimics、miR-152-3P Inhibitor与Control组相比较,增殖能力下降,差异有统计学意义（P<0.05）;同样在A549和A549/DDP细胞中,ox-NCAM1（过表达NCAM1）与Control组相比较,增殖能力上升,差异有统计学意义（P<0.05）;sh-NCAM1（敲降NCAM1）与Control组相比较,增殖能力下降,差异有统计学意义（P<0.05）。Quantitative-RT-PCR检测NCAM1 m RNA表达,mimics NC与miR-152-3p mimics相比较,NCAM1表达明显上升（P<0.05）。通过Western blot检测,miR-152-3p mimics与mimics NC相比较,miR-152-3p mimics蛋白水平明显降低（P<0.01）,inhibitor NC与miR-152-3p inhibitor相比较,inhibitor NC蛋白水平明显降低（P<0.001）。结论:miR-152-3p mimics能够下调NCAM1的表达,抑制A549细胞的侵袭能力,降低顺铂耐药性。
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