【摘 要】
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目的:通过检测各组血清外泌体来源mi R-150表达水平,探讨外泌体来源mi R-150作为急性缺血性脑卒中潜在标志物的可能,为其临床诊治提供一种新的思路。方法:选取2019年5月至2019年11月期间在右江民族医学院附属医院初次确诊的急性缺血性脑卒中患者为AIS组（病例组）,同时段体检中心常规检查人群为对照组,年龄、性别相匹配。使用试剂盒法提取血清外泌体,采用透射电子显微镜观察外泌体形态,使用纳
【基金项目】
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广西自然科学基金（项目编号:2020JJA140089）铝通过 AMPK/ULK1途径介导精子线粒体自噬精子活力损伤机的研究；
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目的:通过检测各组血清外泌体来源mi R-150表达水平,探讨外泌体来源mi R-150作为急性缺血性脑卒中潜在标志物的可能,为其临床诊治提供一种新的思路。方法:选取2019年5月至2019年11月期间在右江民族医学院附属医院初次确诊的急性缺血性脑卒中患者为AIS组（病例组）,同时段体检中心常规检查人群为对照组,年龄、性别相匹配。使用试剂盒法提取血清外泌体,采用透射电子显微镜观察外泌体形态,使用纳米颗粒跟踪技术进行外泌体粒径大小以及浓度的测定,使用蛋白质免疫印迹法检测外泌体标志性蛋白质CD9、HSG101;采用实时荧光定量PCR法检测外泌体中mi R-150表达情况;Logistic回归对外泌体源性mi R-150与急性缺血性脑卒中发生进行关联性分析;利用受试者工作曲线评价外泌体源性mi R-150对急性缺血性脑卒中发病风险预测的价值;生物信息分析方面,使用常用预测micro RNA靶基因在线数据库mi Randa、Target Scan、DIANA、Pic Tar获取预测mi R-150靶基因信息,利用韦恩图展示预测靶基因结果,获取GO和KEGG信息注释靶基因的功能,使用Lnc Base Predicted v.2预测mi R-150相关联的Lnc RNA,预测其参与的竞争性内源RNA调节机制,使用Cytoscape（3.8.2版）可视化竞争性内源RNA网络。结果:研究对象性别和年龄分布在AIS组与对照组之间,差异无统计学意义（P>0.05）。脑卒中危险因素分布方面,AIS组和对照组在高脂血症和高血压史分布上有差异,AIS组发病人数多于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;分离的出含外泌体提取物肉眼观呈淡黄色沉淀,电镜下见椭圆形、边缘清晰的膜性囊泡,直径大小介于30-200nm,AIS组和对照组提取含外泌体重悬液中粒径的大小在100nm左右达到峰值,含外泌体提取物重悬液中检测出外泌体标志性蛋白CD9、TSG101;实时荧光定量PCR结果显示,外泌体中mi R-150 AIS组表达水平高于对照组,差异有统计学意义（P<0.001）,监测AIS组24h、48h、72h时间点的mi R-150表达水平,72h的mi R-150表达水平低于24h和48h的表达水平,但是差异无统计学意义（P>0.05）,分析TOAST亚分型mi R-150表达水平,组间差异无统计学意义（P>0.05）;Logistic回归分析在校正了脑卒中相关危险因素后,结果显示mi R-150表达水平与急性缺血性脑卒中相关联,差异有统计学意义;外泌体源性mi R-150受试者工作曲线下面积为0.883（95%CI:0.810-0.956,P<0.001）;此外Person相关性分析急性脑卒中患者外泌体源性mi R-150表达水平与红细胞计数负相关（r=-0.354,P<0.05）和红细胞比容正相关（r=0.381,P<0.05）,与其他变量未见相关性;韦恩图显示在线数据库预测mi R-150靶基因中,对其取交集得到8个靶基因,其中EGR2、PLP2与脑卒中的关系较大,除此之外,mi R-150还能影响红细胞膜蛋白相关基因SLC4A1、SPTB,多数预测靶基因的分子功能体现在蛋白质结合方面,未富集到相关信号通路,构建的mi R-150竞争性内源性RNA网络中,lnc RNA 17个,m RNA 10个和mi RNA 1个。结论:血清外泌体源性mi R-150在急性缺血性脑卒中患者中表达升高,mi R-150对急性缺血性脑卒中发病风险预测方面可能具有潜在价值。
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