论文部分内容阅读
目的：脑血管病(cerebrovascular disease,CVD)是目前世界范围内第二位常见的致死原因,也是发达国家长期致残的主要原因,严重危害着人类的健康和生存质量。其中缺血性中风(Ischemic stroke,IS)约占全部CAD的70％。除了传统的危险因素如高血压、糖尿病、血脂异常、吸烟、饮酒、肥胖等与脑卒中的发生有关外,许多学者已经从不同的角度证实了IS是一种由遗传因素和环境因素共同作用的复杂性疾病,并且遗传因素在其发病机制中起着尤为重要的作用。因此筛选出对IS具有遗传易感性的个体,并进行个体化的预防和治疗,有望降低IS的发病率、致死率和致残率,从而提高人类的健康水平。而筛选易感基因的主要方法是对候选基因的关联研究。
动脉粥样硬化的形成是IS的重要病理基础。目前的研究已经证实,动脉粥样硬化是多因素影响下的复杂病理过程,其中脂代谢紊乱及炎症反应均与动脉粥样硬化的发生、发展密切相关。因此,本研究着眼于中国北方汉族人群,选择了载脂蛋白M(ApoM)和E-选择素(E-selectin)基因作为候选基因,采用病例-对照研究的方法,比较ApoM基因的多态性位点rs805297、rs805296、m9404941及E-selectin基因的多态性位点rs5355、rs5361、rs1805193的基因型、等位基因型在病例组和对照组中的频率分布差异,进而探讨这两种基因多态性与中国北方汉族人群IS之间的关联,以期为探寻该病的易患基因提供一定的分子遗传学方面的证据。
方法：采用病例-对照研究,病例组按病因不同分为大动脉粥样硬化型IS组和腔隙性脑梗死组。大动脉粥样硬化型IS组选取中国北方汉族人群中的大动脉粥样硬化型IS患者314例,其中男181例,女133例,年龄在49—82岁之间,平均年龄64.43±8.48岁,彼此无亲缘关系。腔隙性脑梗死组选取中国北方汉族腔隙性脑梗死患者131例,其中男69例,女62例,年龄在50—78岁之间,平均年龄64.65±8.05岁,彼此无亲缘关系。选择性别、年龄与病例组相匹配的健康个体389例作为对照组,其中男215例,女174例,年龄在50—79岁之间,平均年龄63.93±6.86岁,彼此无亲缘关系。应用多重单碱基延伸SNP分型技术(Multipies SNaPshot)进行病例组和对照组中目的基因多态性的检测。应用拟合优度x2检验来验证每个SNP位点基因型在抽样群体中的分布是否符合Hardy-Weinberg平衡。对于连续性变量,以均值±标准差表示,采用单因素方差分析进行检验。对于单个SNP位点的数据,通过SPSS13.0统计软件,以x2 Fishers精确概率检验其基因型、等位基因型在病例组与对照组中的频率分布差异。然后再结合临床资料,对相关数据进行Logistic回归分析,以排除传统混杂因素的干扰,P＜0.05为具有统计学差异。ApoM与E-selectin基因对IS的影响以比值比(Odds Ratio,OR)和95％可信区间(95％Confidence Interval,95％CI)来评估。应用SHEsis在线单倍型分析软件计算ApoM与E-selectin基因病例组和对照组单体型的频率分布差异,P＜0.05表示具有统计学差异。
结果：
1、病例组和对照组中ApoM与E-selectin基因的每个多态性位点基因型H-W平衡检验结果显示它们的基因型频率分布未偏离Hardy-Weinberg平衡(p＞0.05)。这表明本课题所选取的研究人群基因遗传平衡,数据来自同一孟德尔群体,适合做遗传学分析。
2、大动脉粥样硬化型脑梗死组ApoM基因rs805296位点的TC基因型及C等位基因型频率分布明显高于对照组,差异有统计学意义(P=0.001,OR=1.85,95％CI:1.29-2.65:P＜0.001,OR:1.78,95％CI:1.29-2.45)。应用条件logistic回归校正传统危险因素后,rs805296位点TC基因型频率分布大血管组仍高于对照组,差异仍有统计学意义(P=0.023,OR=1.714,95％CI:1.076-2.732)。
3、大动脉粥样硬化型脑梗死组ApoM基因rs805297位点基因型频率分布与对照组未见有显著差异。但其A等位基因型频率显著高于对照组(P=0.002,OR=1.38,95％CI:1.10-1.72)。
4、大动脉粥样硬化型脑梗死组ApoM基因rs9404941位点的基因型、等位基因型频率分布与对照组间未见有显著性差异。
5、在大动脉粥样硬化型脑梗死组和对照组中,ApoM基因rs805296、rs805297及rs9404941组建的单体型频率分布在病例组和对照组中无显著性差异。
6、大动脉粥样硬化型脑梗死组与对照组ApoM基因rs805296位点多态性与血脂的相关性分析结果显示:在病例组,ApoM基因rs805296位点各基因型携带者的血甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇及低密度脂蛋白胆固醇的水平均无明显差异。在对照组中,携带CC基因型的个体较携带RR及TC基因型的个体血总胆固醇水平更高(P=0.019),其余指标未见明显差异。在病例组与对照组两组个体间,各基因型携带者的各项血脂指标均未见明显差异。
7、在腔隙性脑梗死组ApoM基因rs9404941、rs805296及rs805297各位点基因型及等位基因型频率分布和对照组未见有显著差异。
8、大动脉粥样硬化型脑梗死组E-selectin基因rs1805193及rs5355各位点基因型及等位基因型频率分布和对照组未发现有统计学差异。
9、大动脉粥样硬化型脑梗死组E-selectin基因rs5361位点的AC基因型及C等位基因型频率分布明显高于对照组,差异有统计学意义(P=0.001,OR=2.76,95％CI:1.54-4.96；P＜0.001,OR=2.80,95％CI:1.58-4.94)。应用条件logistic回归分析校正后,rs5361AC基因型频率分布病例组仍高于对照组,差异有统计学意义(P=0.010,OR=2.665,95％CI:1.265-5.613)。
10、由E-selectin基因rs5355、rs5361构建的单体型频率分布:CC单体型在大动脉粥样硬化型脑梗死组中的频率分布高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.001,OR=2.92,95％CI:1.64-5.22)。
11、E-selectin基因rs5355、rs5361及rs1805193各位点基因型及等位基因型频率分布在腔隙性脑梗死组和对照组中未见有显著差异。
结论：
1、ApoM基因rs805296位点的TC基因型及C等位基因型可能与中国北方汉族人群大动脉粥样硬化型IS具有相关性。
2、ApoM基因rs805297位点的A等位基因型可能是中国北方汉族人群大动脉粥样硬化型IS的独立的危险因素。
3、ApoM基因rs9404941位点的基因多态性可能与中国北方汉族人群大动脉粥样硬化型IS之间无显著的相关性。
4、未发现由ApoM基因rs9404941、rs805297、rs805296位点构建的危险性或保护性单体型。
5、ApoM基因rs805296、rs805297、rs9404941位点的基因多态性可能与中国北方汉族人群腔隙性脑梗死之间无相关性。
6、E-selectin基因rs5361位点的AC基因型及C等位基因型可能与中国北方汉族人群大动脉粥样硬化型IS具有相关性。
7、E-selectin基因rs5355、rs1805193位点的多态性与中国北方汉族人群大动脉粥样硬化型脑梗死之间无显著相关性。
8、E-selectin基因rS5361、rs5355、rs1805193位点的多态性可能与中国北方汉族人群腔隙性脑梗死之间无相关性。
9、E-selectin基因rs5361、rs5355位点构建的CC单体型可能是中国北方汉族人群大动脉粥样硬化型IS的危险单体型,但需要继续进行大样本量的研究证实。