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研究背景
支气管哮喘是全球常见的慢性疾病之一，近几十年来哮喘的发病率病死率在全世界内持续增长。随着全球范围内空气污染的日益加剧、工业化的发展，支气管哮喘的反复发作已经受到医学界的广泛关注。慢性哮喘患者病理表现为气道上皮细胞的破坏脱落，哮喘患者气道黏膜表面上皮细胞的脱落和损害比其他气道炎症性病变更为严重。细胞凋亡可能是上皮细胞损伤的一个机制，从而引起哮喘的反复发作，聚集到气道的炎症细胞产生氧自由基促进了上皮细胞的凋亡，在哮喘的发病机制中起一定的作用。而过去传统的最经典治疗哮喘方案是应用糖皮质激素，应用糖皮质激素可以迅速缓解哮喘症状，但是不能有效预防哮喘的反复发作及减轻气道的损伤，而且长期大量的应用糖皮质激素会导致许多严重不良反应。鉴于传统治疗支气管哮喘的许多不足之处，探索新的有效治疗哮喘靶点及新型药物就显的尤为重要。
研究目的
氧自由基清除剂可否通过抗氧化机制抑制上皮细胞的凋亡尚无报到。观察依达拉奉对气道上皮细胞调亡及bcl-2mRNA、FADD的影响，探讨依达拉奉通过抗氧化机制减轻哮喘豚鼠气道上皮细胞的凋亡，为防治哮喘反复发作应用自由基清除剂提供理论依据并藉此希望寻找到新的哮喘药物治疗靶点。
材料方法
40只健康豚鼠随机分成4组：正常对照组(A)、哮喘模型组(B)、地塞米松干预组(C)、依达拉奉干预组(D)，每组10只。用新鲜配制的OVA、AL(OH)3混悬液按照每只0.2ml的剂量(含OVA100ug、AL(OH)32.25mg)在第1天、第14天以皮下、腹腔多点注射的方式致敏豚鼠，于第24-30天，连续7天每天把豚鼠置于密闭玻璃箱(30cm×40cm×20cm)中用雾化吸入器雾化吸入2％OVA液30分钟激发豚鼠哮喘，制作豚鼠哮喘模型。依达拉奉干预组、地塞米松干预组豚鼠哮喘制作与哮喘组制作相同，但在每次雾化吸入激发之前半小时给予腹腔注射依达拉奉注射液(3mg/kg)、地塞米松磷酸钠注射液(2mg/kg)。正常对照组豚鼠制作过程与哮喘组相同，只是致敏液与雾化吸入的激发液用生理盐水代替。最后一次激发过24小时后将豚鼠杀死，进行肺泡灌洗及灌洗液离心，再进行肺泡灌洗液细胞分类计数，采用ELISA法检测肺泡灌洗液中的IL-5含量、肺组织HE染色行病理学检查、3’末端脱氧核苷转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷(d-UTP)缺口末端标记(TUNEL)法检测上皮细胞凋亡、免疫组织化学染色法检测FADD、MDA与SOD用相应试剂盒检测、逆转录-聚合酶链反应半定量(RT-PCR)法检测肺组织中bcl-2mRNA的表达水平。所有实验数据应用SPSS17.0软件进行统计分析。
实验结果
1各组豚鼠的症状比较：哮喘组豚鼠OVA激发后出现了典型哮喘症状；地塞米松组豚鼠较哮喘组豚鼠明显减轻；依达拉奉干预组豚鼠哮喘症状也有改善；正常对照组豚鼠未见异常症状。
2各组豚鼠肺组织病理：肺组织HE染色结果显示哮喘组豚鼠肺组织有比较多的炎性细胞浸润，结构破坏明显，上皮细胞脱落明显；依达拉奉干预组与地塞米松组均比哮喘组减轻；正常对照组豚鼠正常。
3各组豚鼠BALF中细胞总数及分类：哮喘组、依达拉奉干预组、地塞米松干预组及正常组豚鼠BALF中细胞总数分别是(10.0±1.0)×106、(3.8±0.5)×106、(4.6±0.6)×106、(1.9±0.4)×106;BALF中嗜酸性粒细胞占细胞总数比例分别为(35.6±3.7)％、(8.0±0.8)％、(9.8±1.0)％、(0.7±0.1)％;BALF中淋巴细胞占细胞总数比例分别为(15.4±3.3)％、(5.7±0.5)％、(7.3±0.7)％、(3.2±0.6)％。
4各组豚鼠BALF中IL-5的浓度：哮喘组、依达拉奉干预组、地塞米松干预组及正常对照组豚鼠BALF中IL-5水平分别为(52.44±12.84)pg/ml、(17.84±4.25)pg/ml、(21.74±5.19)pg/ml、(5.68±1.35)pg/ml。
5各组豚鼠肺组织中气道上皮细胞凋亡情况：哮喘模型组中气道上皮细胞凋亡指数为(35.26±4.36)％；依达拉奉干预组凋亡指数为(15.69±3.12)％；地塞米松干预组凋亡指数为(16.23±4.17)％；正常对照组中凋亡指数为(2.12±0.85)％。
6各组豚鼠肺组织中MDA、SOD的含量：哮喘模型组中MDA的含量明显高于依达拉奉干预组及地塞米松干预组，依达拉奉干预组与地塞米松干预组之间无明显差异。正常对照组水平较低。SOD的含量趋势与之相反。
7各组豚鼠肺组织中气道上皮FADD的表达：用免疫组织化学染色法检测FADD的表达，胞浆呈棕黄色的即为FADD阳性细胞，在光镜下观察免疫组化染色制片，观察10个完整的小支气管管壁并计算胞浆染色阳性细胞占上皮细胞的百分比，取其平均值即代表FADD的表达水平，哮喘模型组中FADD的表达明显增加。
8各组豚鼠肺组织bcl-2mRNA表达：RT-PCR检测bcl-2mRNA表达结果示：哮喘组(0.194±0.023)；依达拉奉干预组(0.426±0.043)；地塞米松干预组(0.577±0.056);正常对照组(0.367±0.038)。依达拉奉干预组的表达高于哮喘组。
9统计学分析：BALF中IL-5水平、细胞总数、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞数量均是哮喘组＞依达拉奉干预组＞正常对照组(差异均具有统计学意义P＜0.05)，依达拉奉干预组与地塞米松干预组无差异。与此同时bcl-2mRNA的表达水平是正常对照组＞依达拉奉干预组＞哮喘组(差异均具有统计学意义P＜0.05)，依达拉奉干预组与地塞米松干预组无差异，FADD的表达与之相反。
结论
1．氧自由基清除剂依达拉奉能降低氧应激水平，上调bcl-2mRNA的表达，抑制FADD的表达。依达拉奉可能通过降低氧应激水平减轻气道上皮细胞的凋亡，影响气道重塑。
2．依达拉奉可能通过减轻气道上皮细胞的凋亡影响气道重塑，从而有效的防治哮喘的反复发作，可能成为临床防治哮喘的新药物。