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锌指蛋白是指含有锌指结构的一类蛋白质，在哺乳动物中，锌指蛋白是最大的家族。本实验室获得一个人类新基因ZNFD(基因号为NM_182761)，该锌指蛋白基因尚未被研究。对ZNFD基因进行SMART分析，ZNFD主要的特征是含有一个C2H2结构域，在其氨基酸228-248的位置存在一锌指结构，本实验室便对这个新基因展开了以下几个方面的初步研究。
首先，通过PCR的方法克隆新基因ZNFD，经测序鉴定已成功克隆ZNFD基因，证实了其在人体内真实存在。利用生物信息学方法对其核酸和蛋白质的特征进行分析，结果显示ZNFD基因位于第5号染色体，定位在5q23.1。其cDNA全长1432bp，由5个外显子和4个内含子组成，含有990bp的开放阅读框，编码一个由329个氨基酸组成，分子量为37KD的蛋白。通过PCR方法检测ZNFD基因在人多个组织中的表达情况，结果表明ZNFD基因在前列腺、睾丸、脑、胰、子宫中表达，且睾丸中表达量比较高。通过构建pEGFP-ZNFD真核表达载体，转染如COS-7细胞系，瞬时表达后用荧光显微镜观察ZNFD融合蛋白亚细胞定位，证明ZNFD基因在细胞核中表达。
其次，兔抗人ZNFD多克隆抗体的制备。通过DNAstar软件选取抗原免疫原性较高的部分ORF序列，常规PCR扩增后，定向克隆到原核表达载体pET-32a上，利用大肠杆菌Rosetta-gami(DE3)表达系统表达His-ZNFD融合蛋白，得到相对分子质量约为45kDa的融合蛋白。通过Ni离子亲和柱纯化目的蛋白免疫新西兰大白兔，获得了兔抗人ZNFD多克隆抗血清。通过琼脂糖双向扩散实验检测所制备的多克隆抗体效价达到了1:32，且Western Blot免疫印迹方法鉴定抗体具有高特异性。
最后，构建真核表达载体瞬时转染293T细胞。在ZNFD原核表达并制备多克隆抗体的基础上，进行ZNFD基因真核系统表达的研究。常规PCR扩增ZNFD基因全长后定向克隆到真核表达载体peDNA3-TAP，构建重组质粒pcDNA3-TAP-ZNFD，利用转染试剂盒瞬时转染293T细胞，通过Western blot免疫印迹方法确定ZNFD基因在293T细胞中表达。
本课题对ZNFD基因的功能做了初步的研究。确定ZNFD基因的染色体定位和基因组序列分析，并对结构域、基因表达谱和亚细胞定位进行了预测。并通过实验确定了基因在多种组织中表达和亚细胞定位在细胞核内。通过制备具有一定的效价、具有高特异性的多克隆抗体，为之后的实验奠定了基础。利用人工构建好的适用于蛋白质相互作用研究的真核表达载体pcDNA3-TAP来构建pcDNA3-TAF-ZNFD真核表达重组质粒，瞬时转染293T细胞，通过Western blot免疫印迹方法确定ZNFD基因表达，为之后使用串联亲和层析(tandem affinitypurification，TAP)方法研究细胞水平下与ZNFD相互作用的蛋白质，进一步揭示ZNFD这一锌指蛋白的功能打下基础。