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目的：细胞重构是研究核质互换关系的必由途径，而胞质体(脱核后的“细胞”)的制备是其前提。贴壁生长细胞脱核技术相对成熟，悬浮生长细胞脱核难度较大。本实验旨在探讨悬浮细胞胞质体制备与纯化的最佳条件，为后续的细胞重构奠定基础。
方法：①首先分别采用42％Percoll密度梯度离心法和88×g低速离心法纯化悬浮生长的HL-60细胞。然后在细胞松弛素B(10μg/ml)介导下采用50％Percoll等密度梯度离心法分别在34℃和25℃环境下对HL-60细胞进行脱核制备胞质体；②分别用37％、38％和40％Percoll密度梯度离心纯化胞质体；③应用DAPI/CFSE荧光染料双染色和瑞氏-姬姆萨染色对脱核率、胞质体纯度以及胞质体的大小进行鉴定。
结果：①34℃组3个批次实验脱核率均明显高于25℃组相同批次的脱核率(P<0.01，P<0.05)。3个批次34℃组胞质体直径≥5μm百分比均明显高于同一批次实验的25℃组(均P<0.01)。同一温度下3批实验组间的脱核率无差别(均P>0.05)，胞质体直径≥5μm百分比亦无差别(P>0.05)；②不同批次42％Percoll组间相比，其脱核率均无明显差异(均P>0.05)；③不同批次42％Percoll密度梯度离心脱核后胞质体纯度明显高于同一批次的低速离心组(P<0.01)；④37％和38％Percoll密度梯度离心纯化，其纯度分别为(95.80±0.22)％和(95.43±0.59)％，均高于40％Percoll组(88.84±1.59)％(P<0.05)。但前两组间胞质体纯度没有差别(P>0.05)；⑤DAPI和CFSE双染具有对胞核和胞质很好的区分度。
结论：在细胞松弛素B介导下50％Percoll密度梯度离心脱核，37％或38％Percoll密度梯度离心，DAPI/CFSE双染鉴定，是制备细胞体积小、核浆比大的悬浮生长供体细胞胞质体的适宜方案，该法相对简便，具有普遍的实用价值。