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目的①寻找病情程度不同的帕金森病患者脑脊液,以及非帕金森病疾病对照组患者和健康对照组的脑脊液,分别制作各组脑脊液蛋白质电泳图谱;②对不同组之间蛋白质电泳图谱分别进行比较;寻找不同病情程度帕金森病患者与非帕金森病疾病对照组患者和健康对照组之间共同的差异蛋白质点,探寻PD的诊断生物标志物。方法①随机纳入研究对象共54人,包括帕金森病患者27人,非帕金森病疾病对照组18人(53±2.2岁,男/女=10/8),健康对照组9人(50±4.25岁,男/女=6/3)。帕金森病患者组采用改良webster,Hoehn和Yahr评分量表评分将其分为轻、中、重3个亚组:轻度组14人(56±2.6岁,男/女=9/5),中度组8人(57±4.7岁,男/女=5/3)和重度组5人(59±5.2岁,男/女=4/1)。非帕金森病疾病组患者包括不宁腿综合症3人,肝豆状核变性3人,脊髓小脑性共济失调3人,帕金森综合症3人,特发性震颤3人,脑梗塞3人。健康对照组为肌紧张性头痛9人。②运用双向凝胶电泳技术,以固相pH梯度等电聚焦为第一向,垂直平板十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳为第二向,分别对每组患者脑脊液蛋白质进行分离;③用银染法对电泳后凝胶染色;④凝胶图像扫描后用Pdquest8.0软件进行图像分析和对比,寻找有意义的差异蛋白点;⑤利用基体辅助激光解吸/电离飞行时间质谱技术对差异蛋白质点进行鉴定,分析其意义。结果①在4-7的PH值范围内,经PDquest8.0分析后发现,帕金森病各亚组蛋白质电泳图谱有(789±32)个蛋白质点。轻度组与中度组比较有差异蛋白点32±7个,中度与重度组有差异蛋白点17±8个,轻度组与重度组有差异蛋白点43±11个。②帕金森病各亚组与非帕金森病疾病组和健康对照组分别进行比较,发现其中4个蛋白质点存在显著差异,各组相互比较后可见4点出现率为100%。有3个蛋白质点表达下调,1个蛋白质点表达上调。③4个差异蛋白质点经Mascot数据库查询发现,表达下调的蛋白质点是:DNA-directed RNA polymerase III subunit RPC5(RPC5);Dual serine/threonine and tyrosine protein kinase(DUSTY) (P < 0.05) ; Activity-regulated cytoskeleton-associated protein(ARC , Arg3.1) (P < 0.05) ;表达上调的蛋白质点是G2/mitotic-specific cyclin-B1(CCNB1) (P<0.05)。结论①PD患者组脑脊液蛋白质点在PH4-7的范围内分布均匀,用此范围IPG胶条可较好地分离脑脊液蛋白质。②蛋白质点表达在帕金森轻、中、重各病程中有差异,有待于进一步探索PD不同病程的疾病标志蛋白。③与非帕金森病疾病患者和健康对照组脑脊液的双向电泳图谱比较,本实验发现PD患者脑脊液中有4个差异点差异显著;鉴定出4个差异蛋白的功能涉及蛋白质的转录,脑内神经元的可塑性及与抑郁的发生,细胞周期的调控等。④四个差异蛋白稳定存在于帕金森病的轻、中、重各个病程,与帕金森病关系密切,有望成为帕金森病诊断的分子标志物;可以有效将处于不同病程中的帕金森病病人与其他神经系统疾病以及正常人区别开来,结果重复性和可靠性好。