氢气对脂多糖(LPS)处理的HUVECs线粒体分裂及功能的影响

来源 :中国医师协会麻醉学医师分会2016年中青年论坛 | 被引量 : 0次 | 上传用户:RichieHDD
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  目的:观察氢气对脂多糖(LPS)处理的人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)线粒体功能及动力相关蛋白1(DRPl)表达的影响.方法:离体培养HUVECs,随机分为4组:正常对照组(A组);氢气组(B组);脂多糖组(C组);脂多糖+氢气组(D组).A组不做任何处理,B组D组用氢气饱和培养基培养,同时C组D组用lOug/ml的LPS处理.分别于LPS处理后2、8、24h,用Mito Traker Orange进行线粒体染色,激光共聚焦显微镜观察各组细胞线粒体形态,用海马能量代谢仪测定细胞呼吸功能,用JC-1探针孵育,激光共聚焦显微镜测定各组线粒体膜电位,提取细胞蛋白,用Western Blot法测定DRP1、Mfn2的表达,于LPS处理后8h利用免疫荧光检测DRP1与线粒体的共定位.结果:线粒体形态测定结果显示:与A组相比,C组线粒体长度明显缩短(P<0.05),与C组相比,D组线粒体长度较C组长(P<0.05).OCR测定结果显示:与A组比较,C组各时间点ATP含量和最大呼吸速率均下降(P<0.05),与C组比较,D组各时间ATP含量和最大呼吸速率升高(P<0.05).膜电位测定结果显示:与A组比较,C组各时间点膜电位水平均下降(P<0.05),与C组比较,D组各时间点膜电位水平升高(P<0.05).Western Blot结果显示:与A组比较,C组的DRP1表达在2、8、24h均明显增加(P<0.05),8h变化最明显,与C组相比,D组的DRP1表达在2、8、24h均明显下降(P<0.05).免疫荧光结果显示:与A组相比,C组DRP1与线粒体共定位增多(P<0.05),与C组相比,D组DRP1于线粒体共定位明显减少(P<0.05).结论:氢气可改善LPS所致的HUVECs线粒体功能损伤,其机制可能与抑制DRP1表达增高致的线粒体异常分裂有关.
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