【摘 要】
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目的：鉴定重组卡介苗rBCG-BE1726D的特异性蛋白表达情况及评价其对小鼠的免疫原性.方法：将冻干的菌株rBCG-BE1726D扩大培养后,超滤浓缩收集上清,超声破碎离心收获菌体,采用
【机 构】
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武汉生物制品研究所有限责任公司,武汉430207
【出 处】
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2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会
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目的：鉴定重组卡介苗rBCG-BE1726D的特异性蛋白表达情况及评价其对小鼠的免疫原性.方法：将冻干的菌株rBCG-BE1726D扩大培养后,超滤浓缩收集上清,超声破碎离心收获菌体,采用western-blot的方法进行特异性蛋白检测.用rBCG-BE1726D菌株和BCG菌株免疫Balb/c小鼠,8周后,流式检测小鼠脾淋巴细胞CD4、和CD8、T细胞的百分比,酶联免疫斑点法(enzyme-linked immunospot assay,ELISPOT)及ELISA检测脾淋巴细胞γ干扰素(interferonγ IFN-γ)的分泌水平.结果：菌株rBCG-BE1726D经免疫印迹证实分泌或菌体内存在Ag85B,ESAT-6,RV2626c蛋白；rBCG-BE1726D菌株免疫小鼠后,流式检测CD4+/CD8+T细胞比值[(2.52±0.07)％]明显低于BCG组[(2.85±0.07)％,(P＜ 0.05)],CD8+T细胞比例[(12.89±0.23)％]玥显高于BCG组[(12.02±0.25)％,(P＜0.05)]和PBST对照组[(9.98±0.26)％,P＜0.05]；ELISPOT检测小鼠脾淋巴细胞IFN-γ分泌水平,Ag85B刺激所产生的IFN-γ实验组明显高于对照组,BCG组(7.25±1.03)和rBCG-BE1726D组(9.50±2.60)间差异无显著性(P＞0.05),其他蛋白刺激后均有增高趋势,但各组间没有显著性差异,与ELISA检测结果基本一致.结论：重组卡介苗rBCG-BE1726D有较强的免疫原性,能明显增强Balb/c小鼠的免疫应答水平,但与BCG相比,免疫原性无明显优势,此疫苗的应用前景需做进一步的保护力研究.
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