【摘 要】
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疏水性电荷诱导层析(Hydrophobic Chage-Induction Chromatography,HCIC)是一种新型的混合模式层析分离方法,在中性pH条件下通过疏水作用吸附蛋白,在酸性pH下以静电排斥作用实现蛋白洗脱,具有吸附容量高、选择性好、耐盐性强等优势.采用聚合物接枝可使分离介质具有更高的配基密度,且增加配基与目标蛋白的结合位点,提高动态载量.本文采用电子转移再生的原子转移自由基聚
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疏水性电荷诱导层析(Hydrophobic Chage-Induction Chromatography,HCIC)是一种新型的混合模式层析分离方法,在中性pH条件下通过疏水作用吸附蛋白,在酸性pH下以静电排斥作用实现蛋白洗脱,具有吸附容量高、选择性好、耐盐性强等优势.采用聚合物接枝可使分离介质具有更高的配基密度,且增加配基与目标蛋白的结合位点,提高动态载量.本文采用电子转移再生的原子转移自由基聚合反应(Activators Generated by Electron Transfer Atom Transfer Radical Polymerization,AGET- ATRP),制备聚合物接枝型疏水性电荷诱导型层析介质,以人IgG(hIgG)为吸附蛋白,探讨新介质的抗体结合性能.首先,优化AGET-ATRP反应,制备聚甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)接枝的琼脂糖微球,偶联HCIC配基2-巯甲基咪唑(MMI),制备GMA接枝的HCIC介质G-MMI-4FF.考察了引发剂、单体和配基用量等对介质接枝密度和配基密度的影响,发现接枝密度随引发剂用量增加而增加,配基密度随单体和配基用量增加而增加.其次,考察了不同接枝密度和配基密度的G-MMI-4FF介质对hIgG吸附的影响,对于不同接枝密度的介质,hIgG饱和吸附容量和吸附速率均在合适配基密度下达到最高;不同接枝密度下,介质的最优吸附容量和最优吸附速率随着接枝密度增加而增加.最后,考察了不同接枝密度下具有最优吸附效果的G-MMI-4FF介质对hIgG的动态吸附性能,相比非接枝HCIC介质MMI-4FF、MEP HyperCel和葡聚糖接枝HCIC介质MMI-B-XL-200,新介质对hIgG的动态载量分别提高了861％、123％以及86％.结果表明,AGET-ATRP可实现介质表面接枝聚合物链长度和密度的可控反应,降低催化剂的用量,简化制备步骤;所制备的聚合物接枝型疏水性电荷诱导介质吸附容量大,动态载量高,具有规模化抗体分离应用的潜力.
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