论文部分内容阅读
背景:大量研究己证明,全身麻醉药丙泊酚可能对未成熟神经细胞产生神经毒性作用。虽然星形胶质细胞在哺乳动物脑发育和认知方面有重要意义,但关于全麻药对其作用机制的研究却十分欠缺。方法:腹腔内一次性给予丙泊酚30 mg/kg复制新生大鼠全身麻醉模型,分别用于在体形态学和离体细胞学研究。实验动物随机分为四组(n=20):A组:脂肪乳组(腹腔注射等体积):B组:腹腔单次注射丙泊酚30 mg/kg,1 h后处死;C组:腹腔单次注射丙泊酚30 mg/kg,8 h后处死;D组:腹腔单次注射丙泊酚30 mg/kg,24 h后处死。为了研究全麻药丙泊酚对发育高峰期星形胶质细胞miRNAs的差异表达谱的影响,在体外环境下,利用生物信息学手段,预测显著性差异表达miRNAs的靶基因,并全面分析差异表达miRNAs可能参与的生物学过程,为进一步探讨miRNAs在丙泊酚引起的海马区未成熟星形胶质细胞凋亡中的调控机制提供依据。结果:新生7天大鼠单次腹腔注射丙泊酚30 mg/kg 1 h、8 h、24 h后海马区星形胶质细胞内的Cleaved caspase-3表达水平明显上升,而且,其超微结构也出现了经典的凋亡性改变。通过对丙泊酚作用后miRNAs微流体芯片的深入分析,证实啮齿类动物发育大脑多个显著性变化的miRNAs与神经发育过程密切相关,而且,其所对应的靶基因涉及到多个凋亡性通路的激活。Rno-miR-665/Bcl211(Bcl-x1)在丙泊酚引起的离体发育期星形胶质细胞的凋亡过程中发挥了调节作用,具体表现为:丙泊酚上调rno-miR-665的表达,进而抑制靶基因Bcl211的抗凋亡作用,星形胶质细胞出现凋亡;通过抑制rno-miR-665的表达可增加细胞增殖能力,减少凋亡率。结论:本项目首次尝试在脑发育高峰期,从转录后调控水平探究全麻药对发育大脑海马区星形胶质细胞中miRNAs的影响机制,为防治围术期发育大脑损伤提供以miRNAs为分子工具的新诊疗手段。这种从非编码RNA-胶质细胞-发育大脑这3个层次开展的综合性研究,不仅有助于加深我们对脑功能的理解,也将对患儿药物安全性评价有重大意义。