【摘 要】
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背景与目的：脊髓损伤(spinalcordinjury,SCI)是神经元细胞的轴突临时或永久的损伤,从而导致严重的神经系统功能紊乱.目前,大多数正在研究的治疗脊髓损伤的方法都旨在减少脊髓损伤相关的症状以及促进功能性神经纤维的再生.Ras/Raf/ERK1/2和Ras/PI3K/Akt/mTOR是与细胞生存、生长、增殖和死亡相关的主要细胞内信号通路,越来越多的证据表明这两条信号通路在中枢和外周
【出 处】
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中华医学会第十七届骨科学术会议暨第十届COA国际学术大会
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背景与目的：脊髓损伤(spinalcordinjury,SCI)是神经元细胞的轴突临时或永久的损伤,从而导致严重的神经系统功能紊乱.目前,大多数正在研究的治疗脊髓损伤的方法都旨在减少脊髓损伤相关的症状以及促进功能性神经纤维的再生.Ras/Raf/ERK1/2和Ras/PI3K/Akt/mTOR是与细胞生存、生长、增殖和死亡相关的主要细胞内信号通路,越来越多的证据表明这两条信号通路在中枢和外周神经系统中发挥着重要的作用,例如树突和轴突的形成以及神经元极性的形成等.因此,本研究建立一个脊髓损伤细胞模型(SCIs)以及一个假手术对照脊髓神经元细胞模型(Shams),采用ERK1/2抑制剂U0126以及mTOR抑制剂雷帕霉素单独或联合使用的方法来进一步探讨在脊髓损伤中这两条信号通路对脊髓损伤细胞的影响.方法：动物采用4周龄大小的C57BL/6J小鼠,实验组脊髓损伤细胞模型(SCIgroup),采用NYUImpactor-Ⅱ打击器10g×5mm打击T10节段,对照组脊髓神经细胞模型(Shamgroup),单纯椎板切除,饲养一周后进行取材培养.采用免疫荧光染色来检测神经突触验证细胞模型是否成功建立.采用ERK1/2抑制剂U0126以及mTOR抑制剂雷帕霉素单独或联合使用的方法,通过蛋白免疫印迹法、细胞粘附和迁移实验以及轴突染色实验来探讨Ras/Raf/ERK1/2和Ras/PI3K/Akt/mTOR对脊髓损伤细胞特性和功能的影响.结果：免疫荧光染色的结果显示在SCI组中突触荧光较对照组明显减弱,细胞模型的建立是成功的.蛋白免疫印迹法的实验结果显示在SCI组中U0126抑制ERK蛋白的磷酸化作用较在Sham组中明显,而雷帕霉素同时抑制了SCI组和Sham组p70S6K蛋白的磷酸化,联合使用U0126和雷帕霉素抑制ERK和p70S6蛋白的磷酸化作用最明显.细胞功能实验显示SCI组细胞的迁移能力较Sham组明显增强,而细胞的粘附能力减弱.单药或联合用药抑制两条通路后,SCI组细胞的迁移和粘附能力均增加,但是这三组之间无明显统计学差异.结论：抑制Ras/Raf/ERK1/2信号通路或Ras/PI3K/Akt/mTOR信号通路能够修复脊髓损伤细胞,改善其迁移,粘附功能,联合抑制Ras/Raf/ERK1/2和Ras/PI3K/Akt/mTOR信号通路的效果更好.
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