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目的 通过猪小肠粘膜下层(Small Intestine Submucous,SIS)复合骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)修复鼠跟腱缺损的实验,进一步探索SIS在完成肌腱组织再生性修复的过程和结果,以及BMSCs在修复过程中的促进作用,从而为临床治疗肌腱缺损提供新的理论依据和方法.方法 首先进行Wistar大鼠骨髓间充质干细胞的分离、纯化、传代培养、BrdU标记以及形态学、生物特性的检测.接着利用猪小肠粘膜下层制成SIS,理化方法行去细胞处理.随后进行BMSCs与SIS的复合.将54只健康Wistar 大鼠(200 ～ 300g)随机分为A、B、C组,每组18只.将每只鼠的左侧跟腱的内侧束切除0.8cm,造成肌腱缺损模型,用改良的Kessler缝合法缝接.A组：用轴卷3层的SIS复合BMSCs桥接缺损；B组：用单纯轴卷3层的SIS桥接缺损；C组：自体跟腱切除再回植.移植前3天、移植后3天、l周、2周进行移植免疫学的检测；移植后3、6、9周对标本进行大体形态、组织学观察及图像分析、生物力学测试.结果 1.采用梯度密度离心法分离结合贴壁筛选法可获得较高纯度和活性的BMSCs,并能大量增殖；2.终浓度为10μmol/L和孵育48hBrdU标记率＞80％,且可以连续检测到,提示BrdU标记可用于BMSCs移植入体内后存活、生长和分化的动态观察；3.54只鼠均进入结果分析.①移植后2周内A、B两组与C组白细胞分类计数结果差异无显着性意义(p＞0.05),表明猪小肠粘膜下层作为异种移植材料没有明显免疫排斥；②经免疫组化和天狼星红染色图像分析结果可知：术后3组均表现为成纤维细胞的移入并逐渐增多,细胞形态经历了从修复早期到修复中晚及晚期改变,分泌胶原组织逐渐增多,SIS和自体跟腱均经历了逐渐降解,且同时被新生胶原组织替代的过程.A、B两组Ⅰ型胶原含量逐渐增多,Ⅲ型胶原含量逐渐减少；A组在移植术后9周时Ⅰ型胶原含量明显高于B组(p＜0.05)、Ⅲ型胶原含量要少于B组(p＜0.05)；A组在术后9周时Ⅰ型及Ⅲ型胶原含量与C组接近.结果表明,SIS复合BMSCs组修复替代结果明显优于单纯SIS组,与自体肌腱移植组接近.在术后9周时SIS复合BMSCs组肉眼下猪小肠粘膜下层形态与正常肌腱已基本相同,光镜下猪小肠粘膜下层已被新生的肌腱所完全替代,成纤维细胞沿长轴方向有序排列且出现大量的胶原细胞外间质；③在生物力学测试中,3组均表现为抗负荷强度逐渐增强的过程,在移植后9周时A组生物力学强度(52.17±2.43N)要明显优于B组(46.75±2.89N),P＜0.05,基本接近C组(55.78±2.14N),P＜0.05；④电镜检测结果中：到移植后9周时A、C两组成纤维细胞形态基本接近呈长梭形,处于修复晚期表现；B组成纤维细胞呈长椭圆形,处于修复中晚期表现；数量上B组较A、C两组为多.结论 1、猪小肠粘膜下层修复异种肌腱缺损是一个替代的过程,可以作为修复异种肌腱缺损的支架材料；2、小肠粘膜下层复合BMSCs与单纯SIS相比可以加速肌腱修复替代的过程.猪小肠黏膜下层复合骨髓间充质干细胞修复大鼠肌腱缺损的实验研究.