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目的:探讨NGF-PEG-PLGA-NPs诱导胎鼠大脑隔区来源NSC分化为神经元的作用,以及NGF-PEG-PLGA-NPs联合NSC移植治疗对AD模型鼠学习记忆能力与基底前脑胆碱能神经元、海马突触及AchE纤维的影响.
方法:1.体外实验采用相同浓度NGF及NGF-PEG-PLGA-NPs诱导NSC分化为神经元,细胞免疫荧光检测对神经元进行鉴定,比较NGF及NGF-PEG-PLGA NPs诱导NSC分化为神经元的作用.2.在体实验采用侧脑室注射192IgG-saporin免疫损伤方法制备的AD模型大鼠32只,随机分正常对照组、AD模型组、NSC移植组、NGF-PEG-PLGA-NPs联合NSC移植组,移植组分别进行NSC、NGF-PEG-PLGA-NPs联合NSC基底前脑及海马注射治疗,前两组注射等量生理盐水.采用Morris水迷宫检测其学习记忆能力、细胞免疫组织化学法检测其基底前脑胆碱能神经元及海马突触素改变、组织化学法检测其海马AchE纤维改变.
结果:1.NGF-PEG-PLGANPs诱导NSC分化为神经元.结果显示:对照组、BSA-PEG-PLGA-NPs组、50ng/mlNGF组及NGF-PEG-PLGA-NPs组β-Tubulin Ⅲ阳性神经元分化率分别为:21.60％±5.68％、25.80％±7.22％、41.80％±3.56％、35.40％±5.77％.BSA-PEG-PLGA-NPs组与对照组比较,神经元分化率差异无统计学意义(P＞0.05);50ng/ml NGF组与NGF-PEG-PLGA-NPs组神经元分化率差异无统计学意义(P＞0.05),但两组神经元分化率均高于对照组及BSA-PEG-PLGA-NPs组(P＜0.05).2.NGF-PEG-PLGA-NPs联合NSC移植治疗对AD模型鼠学习记忆的影响结果显示:分组处理4周后,进行Morris水迷宫行为学检测.定位航行实验第4天,NSC移植组及NGF-PEG-PLGA-NPs联合NSC移植组大鼠潜伏期与正常对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05),但均短于模型组(P＜0.05).在空间搜索实验中,NSC移植组及NGF-PEG-PLGA-NPs联合NSC移植组穿过平台位置的次数、平台象限的游泳时间与正常对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05),但均大于模型组(P＜0.05),且NGF-PEG-PLGA-NPs联合NSC移植组平台象限游泳路程大于NSC移植组(P＜0.05).3.NGF-PEG-PLGA-NPs联合NSC移植治疗对AD模型鼠基底前脑胆碱能神经元的影响.结果显示:正常对照组、AD模型组、NSC移植组及NGF-PEG-PLGA-NPs联合NSC移植组隔区P75阳性胆碱能神经元数量分别为59.60±6.27、31.80±6.49、50.80±7.95、60.40±3.51;斜角带区P75阳性胆碱能神经元数量分别为74.00±8.86、45.60±5.32、61.20±4.87、69.20±5.81.NSC 移植组及NGF-PEG-PLGA-NPs联合NSC移植组胆碱能神经元数量与正常对照组差异无统计学意义(P＞0.05),且均多于AD 模型组(P＜0.05);NGF-PEG-PLGA-NPs联合NSC移植组胆碱能神经元数量多于NSC移植组(P＜0.05).4.NGF-PEG-PLGA-NPs联合NSC移植治疗对AD模型鼠海马突触素的影响.结果显示:正常对照组、AD模型组、NSC移植组及NGF-PEG-PLGA-NPs联合NSC移植组海马CA1区突触素染色平均吸光度值分别为0.43±0.026、0.19±0.015、0.31±0.081、0.41±0.081;齿状回突触素染色平均吸光度值分别为0.51±0.016、0.21±0.011、0.29±0.024、0.45±0.025.NSC移植组及NGF-PEG-PLGA-NPs联合NSC移植组突触素染色平均吸光度值与正常对照组差异无统计学意义(P＞0.05),且均高于AD模型组(P＜0.05);NGF-PEG-PLGA-NPs联合NSC移植组突触素染色平均吸光度值高于NSC移植组(P＜0.05).5.NGF-PEG-PLGANPs联合NSC移植治疗对AD 模型鼠海马AchE纤维的影响.结果显示:正常对照组、AD模型组、NSC移植组及NGF-PEG-PLGA-NPs联合NSC移植组海马CA1区AchE阳性纤维数量分别为200.80±4.15、103.40±6.73、152.20±10.33、193.60±9.02.NSC移植组及NGF-PEG-PLGA-NPs联合NSC移植组AchE阳性纤维数量均大于AD模型组(P＜0.05);NGF-PEG-PLGA-NPs联合NSC移植海马CA1区AchE阳性纤维数量大于NSC移植组(P＜0.05),且与正常对照组差异无统计学意义(P＞0.05).
结论:1.NGF-PEG-PLGA-NPs可促进NSC分化为神经元,其作用与相同浓度NGF相当.2.NSC移植治疗及NGF-PEG-PLGA-NPs联合NSC移植治疗均可显著改善AD大鼠的学习记忆能力,均对AD大鼠基底前脑P75阳性胆碱能神经元有补充及保护作用,可促进海马突触形成与AchE阳性纤维的再生.且NGF-PEG-PLGA-NPs联合NSC移植治疗效果优于NSC移植治疗.