生物合成肽法和线性B细胞表位组学研究

• 作 者: 徐万祥[1]王健[1]顾少华[2]季朝能[2]谢毅[2]夏鸿西[3]
• 机 构: 上海市计划生育科学研究所,上海300032
• 出 处: 第18次全国干扰素及细胞因子学术会议
• 发表日期: 2013年期

经过10年左右的努力，完善了可用于线性表位组学研究的改良生物合成肽法改良要点:1)使用了截短的GST188蛋白作为短肽生物表达的载体，达到无需纯化表达融合蛋白，就能即便在使用抗重组蛋白多抗的场合，也能在免疫印迹鉴定中产生清晰的ECL化学发光印迹条带;2)同时构建了仅表达GST188的对照质粒，从而可方便地通过SDS-PAGE分析在LB平板上筛选8肽融合蛋白重组克隆;3)合成的8J18肽编码DNA片段尾添加了TAA终止密码子，避免了市售重组表达质粒多克隆位点区终止密码子前碱基编码4个或更多残基可能对免疫印迹结果的干扰;4)使用了操作更经济简便的热诱导细菌表达系统等。优点:简便、经济、结果可靠，适合普通生物学实验室运用。
鉴于用生物合成肽法和兔抗重组蛋白多抗的抗原表位组学研究结果，内容至少应该包括三个目标:1)通过表位扫描作图，揭示一个或多个同源蛋白乃至一物种全部编码蛋白的精细完整线性表位组(epitome);2)通过基于各鉴定表位最小基序的同源蛋白序列比较，确定它们的保守性和特异性;3)发现解码的表位组中抗体中和性或功能性表位。前二者目标己在人乳头瘤58型病毒(HPV58)三个主要蛋白E6, E7和L1的表位组学研究中予以实现，后者目标也是完全可以想见的，因为通过制备基于各精细表位的单抗或合成肽多抗，结合抗病毒中和实验就能实现(以往多以鉴定或计算机预测的一个抗原性肽开展这一研究)。