【摘 要】
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细胞色素P450是生物体内广泛存在的一种多功能氧化酶,通过降解代谢外源物质,参与昆虫对多种杀虫剂产生抗性.为明确棉蚜(Aphis gossypii Glover)细胞色素P450 基因CYP6CY3
【机 构】
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新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室,乌鲁木齐830046
【出 处】
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新疆动物学会2016年学术研讨会暨第七届青年学术论坛
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细胞色素P450是生物体内广泛存在的一种多功能氧化酶,通过降解代谢外源物质,参与昆虫对多种杀虫剂产生抗性.为明确棉蚜(Aphis gossypii Glover)细胞色素P450 基因CYP6CY3 特性及在棉蚜抗药性中发挥的作用,采用RT-PCR及3’-RACE 技术克隆得到棉蚜P450 CYP6CY3 基因的开放阅读框(openreading frame,ORF),进行生物信息学分析；利用大肠杆菌进行原核表达,纯化融合蛋白,免疫昆明白小鼠制备多克隆抗体.结果表明,棉蚜P450 CYP6CY3 基因包含1266 bp 的开放阅读框,编码421 个氨基酸,预测蛋白分子量为48.8 kDa,理论等电点为8.99,氨基酸序列包括P450 家族的5 个特征基序.系统进化分析表明,棉蚜CYP6CY3 基因与豌豆长管蚜,麦双尾蚜,桃蚜聚为一类亲缘关系较近.SDS-PAGE 检测和Western bloting 鉴定表明棉蚜CYP6CY3 体外融合表达成功.用切胶回收的方法,纯化得到融合蛋白,采用皮下多点注射法将融合蛋白注射到昆明白小鼠体内,免疫3 次后,用ELISA 法检测抗体的效价,得到鼠抗CYP6CY3 血清的效价达到1：409 600,Western bloting 检测显示此抗血清能与融合的CYP6CY3 蛋白特异性结合.说明利用蛋白免疫法制备了高滴度、特异性强的鼠抗CYP6CY3 的多克隆抗体.棉蚜P450 基因CYP6CY3 的克隆、原核表达及抗体制备,为进一步研究 CYP6CY3 基因在棉蚜抗药性方面的作用奠定基础.
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