【摘 要】
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细胞色素P450(CYP450)是一类以血红素为辅基的B 族细胞色素超家族,是昆虫体内的一种很重要的解毒酶系,它参与内源性物质和包括药物、环境化合物在内的外源性物质的代谢.
【机 构】
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新疆大学生命科学与技术学院,新疆生物资源基因工程重点实验室,乌鲁木齐830046
【出 处】
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新疆动物学会2016年学术研讨会暨第七届青年学术论坛
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细胞色素P450(CYP450)是一类以血红素为辅基的B 族细胞色素超家族,是昆虫体内的一种很重要的解毒酶系,它参与内源性物质和包括药物、环境化合物在内的外源性物质的代谢.该家族成员在催化反应过程中具有的高度特异性使其在化工、环保及药物代谢等领域都具有极大的应用价值,从而成为生物催化研究热点.为了深入了解细胞色素P450 CYP6J1 的结构和功能,本实验克隆获得了棉蚜P450 CYP6J1 基因,对该基因进行信息学及原核表达分析,通过SDS-PAGE 检测目的蛋白的表达结果,并用Western-blot 进行验证.亲和层析法分离纯化棉蚜融合蛋白P450 CYP6J1,SDS-PAGE 检测纯化产物.用获得的蛋白免疫小鼠,制备棉蚜P450 CYP6J1 多克隆抗体；采用ELISA 法检测抗体效价；免疫组化法检测抗血清特异性.结果表明,P450 CYP6J1 序列长1398 bp,编码氨基酸数为465,理论分子量为53.67 kD,理论等电点PI 为8.80.氨基酸序列分析表明该序列具有完整的开放阅读框,且没有信号肽.同源性分析表明,棉蚜cDNA 序列推导的氨基酸与豌豆蚜的保守性最为接近,一致性可达92％.在大肠杆菌Escherichia coli BL21 中表达获得的His-CYP6J1 蛋白,并用Western-blot 检测目的蛋白大小正确.纯化的目的蛋白免疫小鼠后得到多抗血清,ELISA 法检测抗血清效价达1：200000.免疫组化结果显示此多克隆抗体能够与棉蚜天然蛋白P450 CYP6J1 特异性结合,而在棉铃虫中没有.这些结果为进一步研究棉蚜细胞色素P450 CYP6J1 在棉蚜中的作用机制提供了基础.
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