【摘 要】
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大田软海绵酸(Okadaic acid, OA)是一种小分子腹泻性贝类毒素.它在全球分布较广,中毒事件时有发生,对人类健康和海产品工业造成了严重危害.传统的OA检测方法有生物分析法、色谱法和免疫法,但生物分析法耗时较长,色谱法需要复杂和昂贵的仪器,免疫法虽然简便且可用于现场测试,但动物免疫过程复杂耗时,制备的抗体也不够稳定.适配体是一类新型的分子识别元件,具有和抗体相似的亲和力和特异性,而且比抗体
【机 构】
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江南大学食品学院 江苏无锡214122;江南大学食品科学与技术国家重点实验室 江苏无锡214122;苏州科技大学化学生物与材料工程学院 江苏苏州215009
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大田软海绵酸(Okadaic acid, OA)是一种小分子腹泻性贝类毒素.它在全球分布较广,中毒事件时有发生,对人类健康和海产品工业造成了严重危害.传统的OA检测方法有生物分析法、色谱法和免疫法,但生物分析法耗时较长,色谱法需要复杂和昂贵的仪器,免疫法虽然简便且可用于现场测试,但动物免疫过程复杂耗时,制备的抗体也不够稳定.适配体是一类新型的分子识别元件,具有和抗体相似的亲和力和特异性,而且比抗体更稳定、更易修饰.本研究基于竞争性荧光适配体分析法和滚环复制,构建了一种快速、灵敏、特异的OA检测方法.首先,将生物素化的适配体固定在亲和素包被的酶标板上.然后,将适配体互补-滚环复制引物复合序列与适配体互补结合,并进行滚环复制.再加入FAM标记序列与液环复制产物杂交结合得到荧光信号探针.OA可与适配体上互补结合的荧光信号探针竞争.当样品中没有OA时,信号探针与适配体杂交结合,产生荧光信号.当样品中含有OA时,信号探针会被OA竞争取代,使荧光信号减弱.在滚环复制扩增信号的基础上,通过优化条件,增大了该荧光检测法的线性范围,降低了检测限.同时,该方法也具有较好的重复性和加标回收率,可以用于检测海产品中的OA.
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