【摘 要】
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泰勒虫病是引起牛的一类重要疾病,主要病原包括环形泰勒虫、瑟氏泰勒虫/东方泰勒虫和小泰勒虫等.其中,环形泰勒虫是引起热带泰勒虫病的主要病原,广泛分布在北非、欧洲南
【机 构】
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家畜疫病病原生物学国家重点实验室,甘肃省动物寄生虫病重点实验室,中国农业科学院兰州兽医研究所 甘肃 兰州 730046
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第十三次学术研讨会
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泰勒虫病是引起牛的一类重要疾病,主要病原包括环形泰勒虫、瑟氏泰勒虫/东方泰勒虫和小泰勒虫等.其中,环形泰勒虫是引起热带泰勒虫病的主要病原,广泛分布在北非、欧洲南部、印度、中东和亚洲.在日本和韩国,瑟氏泰勒虫是引起放牧牛和水牛的一种主要血液原虫.环形泰勒虫和瑟氏泰勒虫在我国均有分布.研究表明,环形泰勒虫致病性较强,而瑟氏泰勒虫分布范围较广.在野外感染情况下,两种泰勒虫经常发生混合感染,由于形态非常相似,传统显微镜检测不能很好把两种泰勒虫完全区分.为能够更好的检测区分两种泰勒虫,本研究中建立了一种鉴别诊断两种泰勒虫的多重PCR方法.通过序列比对,设计了针对环形泰勒虫cytochrom B(COB)和瑟氏泰勒虫转录间隔区(ITS)的特异性引物.通过实验验证,两对引物能够在一个PCR反应体系中分别扩增出环形泰勒虫(393bp)和瑟氏泰勒虫(818bp)的基因片段.将实验室中储存的两种泰勒虫标准株DNA进行10倍比稀释(10ng/μl-10-8 ng/μl),用稀释后的DNA对引物的敏感性进行了测试.在多重PCR条件下,环形泰勒虫引物可检测到10-7 ng/μl的虫体DNA,瑟氏泰勒虫引物能够检测到10-6 ng/μl的虫体DNA.两对引物的敏感性均高于已报道的PCR方法.特异性检测试验证实,两对引物只能够特异性的扩增相对应的泰勒虫基因,与国内报道的其它泰勒虫和巴贝斯虫无交叉反应.为验证该方法的应用性,我们将建立的多重PCR方法和已发表的针对环形泰勒虫COB基因和瑟氏泰勒虫的MPSP基因的PCR方法对国内8各省市的378份牛血液样品分别进行了检测,并将检测结果进行了比对.多重PCR方法检测出环形泰勒虫感染11例,瑟氏泰勒虫感染81例,混合感染3例,其它两种方法分别检测出环形泰勒虫感染6例,瑟氏泰勒虫感染80例,混合感染1例.通过野外样品检测证实,环形泰勒虫在广东省、内蒙古、吉林省和重庆市存在,瑟氏泰勒虫在检测的8个省市均有分布.研究结果显示本研究中建立的多重PCR方法具有较高的敏感性和特异性,与已发表的PCR方法检测效率相似,可以应用于环形泰勒虫和瑟氏泰勒虫的流行病学调查.
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