【摘 要】
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为探讨蓝氏贾第虫贾第素α-13的致病作用,采用PCR扩增该基因片段,将扩增产物克隆入pMD18-T载体,经BamHⅠ和Hind Ⅲ双酶切后连入原核表达载体PET-28a(+),将阳性重组表达质
【机 构】
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华南农业大学兽医学院,广东,广州 510642
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第十三次学术研讨会
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为探讨蓝氏贾第虫贾第素α-13的致病作用,采用PCR扩增该基因片段,将扩增产物克隆入pMD18-T载体,经BamHⅠ和Hind Ⅲ双酶切后连入原核表达载体PET-28a(+),将阳性重组表达质粒转化BL21(DE3)感受态细胞.先采用常规IPTG诱导,并对诱导条件(诱导时间、浓度、温度)进行优化,菌体裂解后进行SDS-PAGE和Western blot分析；后采用复合自动诱导培养基(ZYM-5052)诱导并与IPTG诱导结果进行比较.经Ni-NTA Rensin层析柱纯化贾第素α-13融合蛋白并对其进行生物信息学分析.结果显示,贾第素α-13基因全长为1038bp,编码345个氨基酸,该蛋白有信号肽、无跨膜区、亲水性较好.SDS-PAGE和Western Blot鉴定结果显示融合蛋白Mr为40kDa,主要以可溶性形式存在.在0.6mmol/L IPTG、25℃诱导5h后,该蛋白的表达量最大,约占菌体总蛋白的21％；采用ZYM-5052诱导表达的融合蛋白稍高于IPTG诱导,占菌体总蛋白28.8％.经Ni-NTA Rensin层析柱纯化后得到了纯度较高的重组蛋白.结果表明本实验成功克隆、表达并纯化了α-13贾第素蛋白,为贾第素α-13的亚细胞定位及功能研究奠定了良好基础.
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