【摘 要】
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为了研究镰形扇头蜱的miRNAs在脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激后先天性免疫反应中的作用,本论文在已有的差异表达miRNAs分子筛选的基础上,通过实时荧光定量PCR鉴定
【机 构】
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中国农业科学院上海兽医研究所,农业部动物寄生虫病重点实验室,上海 200241
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第十三次学术研讨会
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为了研究镰形扇头蜱的miRNAs在脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激后先天性免疫反应中的作用,本论文在已有的差异表达miRNAs分子筛选的基础上,通过实时荧光定量PCR鉴定了LPS注射后差异表达下调的5个miRNAs分子,即miR-184、miR-79-3p、miR-71-5p、miR-1-3p和miR-133-3p.另外,应用反转录PCR克隆这些miRNAs的前体序列,并且通过mFold软件预测了这些miRNAs的前体发夹结构,进一步验证了这些miRNAs.通过实时荧光定量PCR发现这五种miRNAs相比较于其它发育阶段和器官,在幼蜱和脂肪体中表达量都是最高的.本论文还研究了miR-133-3p在蜱吸血前后不同器官的表达特征,发现在蜱吸血后的脂肪体、唾液腺和卵巢的表达量相较于未吸血时明显下调；同时,实验组注射miR-133-3p agomirna后miR-133-3p在半饱血蜱及其脂肪体表达量明显增加,但实验组相比于对照组蜱的吸血等生物学性状并没有显著差异,表明miR-133-3p在蜱吸血中无重要作用.但是,miR-133-3p在感染有巴贝斯虫的饱血幼蜱中表达量显著下降.最后,利用双荧光素酶报告基因检测系统和t检验法分析验证miR-133-3p的靶基因,发现降血钙素基因相关Ⅰ型受体(CGRPR)是miR-133-3p的靶基因之一.
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