【摘 要】
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目的:对从噬菌体抗体库中筛选的人源抗狂犬病毒单链抗体A12进行可溶性表达及特异性鉴定和中和活性检测.方法:将表达人源单链抗体的菌株A12进行诱导后进行SDS-PAGE及Westernblot检测,用流式细胞仪(FACS)检测其结合感染表达狂犬病毒G蛋白的重组痘苗病毒Vero细胞的能力,用快速荧光灶抑制实验(RFFIT)测定A12表达产物的中和活性.结果:westernblot显示经诱导的A12Sc
【机 构】
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武汉生物制品研究所,武汉,430060
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目的:对从噬菌体抗体库中筛选的人源抗狂犬病毒单链抗体A12进行可溶性表达及特异性鉴定和中和活性检测.
方法:将表达人源单链抗体的菌株A12进行诱导后进行SDS-PAGE及Westernblot检测,用流式细胞仪(FACS)检测其结合感染表达狂犬病毒G蛋白的重组痘苗病毒Vero细胞的能力,用快速荧光灶抑制实验(RFFIT)测定A12表达产物的中和活性.
结果:westernblot显示经诱导的A12ScFv表达产物与抗C-myc抗体在约30KD处有强阳性表达带.FACS结果表明A12与表达狂犬病毒G蛋白的重组痘苗病毒感染的Vero细胞有特异性反应.RFFIT结果表明,A12ScFv在1:27倍稀释时能完全中和病毒.
结论:A12经诱导后获得了可溶性表达,表达产物能特异性结合狂犬病毒G蛋白,并对狂犬病毒具有一定的中和活性.
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