【摘 要】
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目的:构建神经纤毛素1(Neuropilin-1,NRP-1)短发夹RNA(short hairpin HNA ,shRNA)慢病毒表达载体，体外评价其对人舌鳞状细胞癌细胞株SCC25(squamous cell carcinoma 25)分化的
【机 构】
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南京医科大学口腔医学院 口腔医学研究所江苏省口腔医院口腔颌面外科
【出 处】
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2013国际暨全国第十二届头颈肿瘤学术大会
论文部分内容阅读
目的:构建神经纤毛素1(Neuropilin-1,NRP-1)短发夹RNA(short hairpin HNA ,shRNA)慢病毒表达载体，体外评价其对人舌鳞状细胞癌细胞株SCC25(squamous cell carcinoma 25)分化的影响。
方法:根据shRNA设计原则，设计合成用于体内干扰NRP-1编码序列的shRNA，重组人慢病毒载体PLKO.1。将构建正确的PLK0.1! NRP-1-shRNA感染SCC25,western blot和实时荧光定量PCR检测NRP-1的表达，划痕实验和实时荧光定量PCR检测其对SCC25分化的影响。
结果:测序证实重组质粒构建成功;体外试验表明，SCC25转染了NRP-1-shRNA后NRP-1表达水平降低，干扰效率达65％。划痕实验结果表明NRP-1下调明显降低了SCC25的迁移能力。实时荧光定量PCR结果表明NRP-1下调可以导致SCC25上皮标记蛋白钙粘附蛋白(epithelialcadherin,E-cadherin)表达上调，而间充质标记蛋白纤粘蛋白(fibronectin,FN)和波形蛋白(Vimentin,VIM)表达下调，与对照组相比具有显著性差异(P<0.05)。
结论:慢病毒介导的NRP-1-shRNA成功在体外抑制了目的基因的表达，并影响SCC25的分化。
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