【摘 要】
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目的 制备杜氏利什曼原虫rAST1重组蛋白,探讨其用于黑热病诊断的价值.方法 以杜氏利什曼原虫L.d.GS的基因组DNA为模板,通过PCR扩增获得amastni基因扩增产物.将amastin基因定向克隆到pcDNA3.1(+)中,构建重组质粒pcDNA3.1(+)-GS-amastin.amastin基因经测序,同源性分析,并对其跨膜区结构进行分析.用PCR方法扩增得到amastin基因N端第一个
【机 构】
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四川大学寄生虫学教研室 610041
【出 处】
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中华医学会第六次全国艾滋病、病毒性丙型肝炎暨全国热带病学术会议
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目的 制备杜氏利什曼原虫rAST1重组蛋白,探讨其用于黑热病诊断的价值.方法 以杜氏利什曼原虫L.d.GS的基因组DNA为模板,通过PCR扩增获得amastni基因扩增产物.将amastin基因定向克隆到pcDNA3.1(+)中,构建重组质粒pcDNA3.1(+)-GS-amastin.amastin基因经测序,同源性分析,并对其跨膜区结构进行分析.用PCR方法扩增得到amastin基因N端第一个胞外区序列(命名为ast1),并将其定向克隆到质粒pET32a(+)上,成功构建原核重组表达质粒pET32a(+)-ast1.重组蛋白rAST1在大肠杆菌中高效表达,并用固定化金属离子亲和层析(IMAC)法进行纯化.以重组蛋白rAST1作为包被抗原,用间接ELISA的方法检测内脏利什曼病人血清.
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