【摘 要】
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目的 建立结核病早期快速诊断的Dip-stick实验方法,评估其诊断价值并开发为试剂盒,应用于临床结核病患者的早期诊断工作.方法 1)重组质粒的构建与重组蛋白的表达:PCR扩增目的基因片段cfp10,esat6,ppe68,以柔性片段链接PCR扩增得到重组基因cfp-10-esat-6及cfp-10-esat-6-ppe-68,将其分别转入表达质粒载体pet32a,导人大肠杆菌BL21,以IPTG
【机 构】
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四川大学寄生虫学教研室 四川省疾病预防控制中心
【出 处】
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中华医学会第六次全国艾滋病、病毒性丙型肝炎暨全国热带病学术会议
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目的 建立结核病早期快速诊断的Dip-stick实验方法,评估其诊断价值并开发为试剂盒,应用于临床结核病患者的早期诊断工作.方法 1)重组质粒的构建与重组蛋白的表达:PCR扩增目的基因片段cfp10,esat6,ppe68,以柔性片段链接PCR扩增得到重组基因cfp-10-esat-6及cfp-10-esat-6-ppe-68,将其分别转入表达质粒载体pet32a,导人大肠杆菌BL21,以IPTG诱导其高效表达.2)蛋白纯化与抗体的制备:以Histrap HP亲和层析柱纯化重组蛋白CE、CEP,凝血酶切除His标签后,以高纯度蛋白抗原免疫家兔得不同多克隆抗体,以饱和硫酸铵法粗提、protein A亲和层析柱精提后得纯化抗体.3)制备胶体金免疫层析试纸条:以胶体金包被的抗CEP抗体检测病人血清中结核杆菌抗原,结合于固定于NC膜上的抗CE抗体而显示红色.210份病人血清用于确认试纸条的诊断价值.
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