【摘 要】
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[目的]谷氨酰胺转氨酶(Transglutaminase,TG)是一种催化蛋白质或多肽链中谷氨酰胺残基进行酰胺基转移反应的酶.在高等动物体内参与伤口愈合、细胞凋亡、组织纤维化、神经
【机 构】
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华东理工大学药学院,上海市化学生物重点实验室,上海200237
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[目的]谷氨酰胺转氨酶(Transglutaminase,TG)是一种催化蛋白质或多肽链中谷氨酰胺残基进行酰胺基转移反应的酶.在高等动物体内参与伤口愈合、细胞凋亡、组织纤维化、神经变性、乳糜泻、动脉粥样硬化和癌症等多个生理病理过程.大量研究表明,TG活性与细胞凋亡相关,尤其是处在凋亡中的细胞存在TG的过度表达,而采用小分子干扰RNA阻断内源性的TG活性可以逆转肿瘤细胞的化疗耐药和迁移侵袭.目前,TG参与细胞凋亡的确切的生理学机制仍然未明,而有关昆虫TG的研究尚罕见报道.本文主要研究粘虫(Mythimna separata Walker)体内TG的性质,并探讨TG在粘虫生长发育过程中的生理调节作用.[方法]采用硫酸铵沉淀、DEAE-纤维素-52和Sephadex G-100凝胶层析来分离纯化TG酶.采用差速离心法研究粘虫体内TG酶的分布情况.采用正交实验和单因素实验法研究TG的酶学性质.[结果]硫酸铵在55％饱和度时沉淀TG酶效果最佳.用Tris-HCl (0-1.0M NaCl,pH8.0)梯度洗脱离子交换柱,TG酶能被0.3-0.6 M NaCl解吸附.TG分子量为57.59KDa,最适反应温度为37℃,最适pH为7.0,能稳定存在于27-47℃、pH 6.5-8.0酶反应体系中,具有一定的Ca2+依赖性.TG酶广泛分布在粘虫的组织和体液中,且TG酶水平在不同龄期幼虫体内存在显著差异,其中在1-2龄期幼虫体内,TG酶主要存在于细胞核和细胞碎片中,而在3-5龄期幼虫体内,TG则集中分布于胞质溶胶中.[结论]粘虫TG与人组织型TG2的性质相似,参与调节粘虫幼虫的生长发育和生理免疫.
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