【摘 要】
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[目的]对烟粉虱Bemisia tabaci (Gennadius)含clip结构的丝氨酸蛋白酶(clip-domain serine proteases in Bemisia tabaci,BtCLIPs)转录组数据进行分析及部分序列验证和基
【机 构】
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中国农业科学院植物保护研究所,北京100193
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[目的]对烟粉虱Bemisia tabaci (Gennadius)含clip结构的丝氨酸蛋白酶(clip-domain serine proteases in Bemisia tabaci,BtCLIPs)转录组数据进行分析及部分序列验证和基因相对表达量时空动态趋势,为建立BtCLIPs可能参与的免疫级联反应路径提供重要线索.[方法]采用新一代高通量测序技术对感染和非感染白僵菌的烟粉虱4龄若虫转录数据中含clip结构的丝氨酸蛋白酶数据进行分析；通过测序方法验证了部分转录组数据的正确性；利用Pfam和SMART预测蛋白质结构域；氨基酸多序列比对和遗传进化分析在MEGA6.0软件中完成；并通过实时荧光定量qRT-PCR检测分析球孢白僵菌侵染烟粉虱4龄若虫不同时间后BtCLIPs的时空表达模式.[结果]分析烟粉虱75个丝氨酸蛋白酶基因序列,其中有8个丝氨酸蛋白酶基因含有特定的clip结构域；通过测序方法验证了4个开放阅读框全长序列,可以进行后续的蛋白表达及功能验证；通过烟粉虱丝氨酸蛋白酶同源性与系统进化分析,发现有3个BtCLIPs表现出较近的亲缘关系,BtCLIP28与意大利蜜蜂AmSP14、BtCLIP8与家蚕BmCLIP3、BtCLIP8与烟草天蛾MsHP1的clip丝氨酸蛋白酶的氨基酸序列相似度较高；8个烟粉虱clip丝氨酸蛋白酶基因在不同诱导时间点与对照组相比均有明显上调,在感染48h时的相对表达量达到最高.[结论]烟粉虱8个氨基酸序列均为含clip结构的丝氨酸蛋白酶,且在不同时间的处理条件下相对表达量均出现上下调的动态趋势,参与到烟粉虱的先天免疫反应中.
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