【摘 要】
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[目的]大量研究已证实,COX-2抑制剂具有抑制白血病细胞增殖、促进细胞凋亡、影响细胞周期、抑制白血病细胞的转移、逆转白血病细胞耐药等作用.塞来昔布作为一种选择性COX-2抑制剂,其抗白血病作用机制尚未明确.本研究通过体外培养急性髓系细胞白血病细胞株HL-60细胞,观察塞来昔布对HL-60细胞增殖、凋亡与细胞周期分布的影响,并检测COX-2、cyelinD1、cyclinE1mRNA表达水平的变化
【机 构】
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河北省人民医院血液科 河北石家庄 050051
【出 处】
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河北省医学会血液学分会第七届年会暨河北省医师协会血液科医师分会第四届年会
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[目的]大量研究已证实,COX-2抑制剂具有抑制白血病细胞增殖、促进细胞凋亡、影响细胞周期、抑制白血病细胞的转移、逆转白血病细胞耐药等作用.塞来昔布作为一种选择性COX-2抑制剂,其抗白血病作用机制尚未明确.本研究通过体外培养急性髓系细胞白血病细胞株HL-60细胞,观察塞来昔布对HL-60细胞增殖、凋亡与细胞周期分布的影响,并检测COX-2、cyelinD1、cyclinE1mRNA表达水平的变化,初步探讨塞来昔布抗白血病的可能机制.[方法] HL-60细胞株于10％小牛血清的RPMI 1640培养液中,37℃、5％CO2饱和湿度孵箱中培养,取对数生长期细胞用于实验.不同浓度的塞来昔布作用HL-60细胞24h后,用CCK-8法测定细胞增殖活性,应用流式细胞技术分析细胞凋亡及细胞周期分布的变化,利用定量RT-PCR的方法检测细胞周期蛋白D1、E1及COX-2mRNA的表达情况. [结果]1.终浓度为20、40、60、80、100、120、160 μ mol/L的塞来昔布分别作用于HL-60细胞24h,其增殖抑制率分别为(17.31±1.15)％、(30.94±1.93)％、(48.84±1.69)％、(79.27±1.15)％、(89.18±1.73)％、(94.74±1.50)％、(94.60±0.87)％, 24h的IC50值为63.037 μ mol/L.提示塞来昔布对HL-60细胞有明显的增殖抑制作用,且呈现一定的浓度依赖性(相关系数r=0.955). 2.20、40、60 μ mol/L塞来昔布作用于HL-60细胞24h后,流式细胞仪检测细胞凋亡率分别为(10.04±0.15)％、(30.98±1.08)％、(57.15±0.69)％,均高于对照组(1.85±0.08)％(p＜0.05).细胞凋亡率与药物浓度呈现正相关(r=0.990).3.20、40、60 μ mol/L塞来昔布作用于HL-60细胞24h后,流式细胞仪检测细胞周期分布,G0/G1期分别为(58.36±0.26)％、 (69.95±0.70)％、 (80.23±0.23)％,均高于对照组(41.27±0.33)％(p＜0.05),且具有一定的浓度依赖性(相关系数r=0.988).4.定量RT-PCR法检测cyclinD1、cyclinElmRNA含量：20、40、60 μ mol/L塞来昔布作用24h后,HL-60细胞cyclinD1的RQ值为(0.8663±0.0140)、(0.4393±0.0182)、(0.3205±0.0150),与药物浓度呈负相关(r=-0.970),cyclinE1的RQ值为(0.5850±0.0250)、(0.2990±0.0169)、(0.1660±0.0070),与药物浓度呈负相关(r=-0.974),RQ值与对照组比较差异有统计学意义(p＜0.05),各浓度组间两两比较差异有统计学意义(p＜0.05).5.塞来昔布对HL-60细胞COX-2 mRNA表达的影响：20、40、60μ mol/L塞来昔布作用24h后,HL-60细胞COX-2的RQ值为(0.6858±0.0185)、 (0.4668±0.0276)、 (0.1572±0.0083),与药物浓度呈负相关(r=-0.997).RQ值与对照组比较差异有统计学意义(p＜0.05),各浓度组间两两比较差异有统计学意义(p＜0.05).[结论]塞来昔布呈浓度依赖性抑制HL-60细胞增殖,并可能通过下调cyclinD1、cyclinE1的表达引起细胞G0/G1期阻滞,下调COX-2的表达诱导细胞的凋亡.
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