【摘 要】
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通过改进的碳二亚胺法制备环丙沙星-牛血清白蛋白偶联物(CIP-BSA),用紫外扫描、十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)方法鉴定偶联物.利用制备的CIP-BSA偶联物作
【机 构】
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上海海洋大学国家水生动物病原库,上海201306
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通过改进的碳二亚胺法制备环丙沙星-牛血清白蛋白偶联物(CIP-BSA),用紫外扫描、十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)方法鉴定偶联物.利用制备的CIP-BSA偶联物作为免疫原,免疫Balb/c小鼠,用杂交瘤技术制备环丙沙星单克隆抗体,并对其效价、亲和力和特异性进行鉴定.结果表明：CIP-BSA的偶联比为30∶1.经间接酶联免疫吸附(ELISA)法筛选,共筛出两株敏感、特异的杂交瘤细胞(JY-1、JY-2).这两株细胞的腹水经纯化后的抗体效价分别为5.12×106、2.56× 106,亲和力常数分别为2.88× 109、2.46× 109L/mol,两抗体均为IgG1a,取亲和力高的JY-1进行竞争抑制测定,IC50值可以达到9.83ng/mL.该单抗仅与恩诺沙星存在交叉反应,交叉反应率为95％.通过验证得到的JY-1细胞株分泌的单克隆抗体可用于水产品中环丙沙星残留的快速检测.
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