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目的:探索利用冷冻干燥技术制作多孔脱细胞角膜基质作为支架材料构建活性角膜基质的可行性.
方法:使用磷脂酶A2制备脱细胞猪角膜基质(Acellular porcine comeal stroma,APCS),通过预冻温度-10℃、-80℃及-198℃冷冻干燥加工成多孔脱细胞角膜基质,评价制备冻干脱细胞角膜基质(Freezing-dry acellular porcine corneal stroma,FD-APCS)物理学特点.利用动态培养系统体外构建带细胞活性角膜基质,评价细胞增殖活性,确定体外构建最适宜载体及影响参数.囊袋板层角膜移植以评价FD-APCS透明性、生物稳定性及愈合.
结果:体外实验证实FD-APCS孔径随预冻温度下降而逐渐减小;孔隙率随预冻温度下降而增高，均较APCS明显增高;比表面积随预冻温度下降而增大，均较APCS明显增大;孔径分布≥1Oμm随预冻温度下降而减少，＜10μm孔径比例随预冻温度下降而增加;三组FD-APCS渗透胜较APCS明显增高，-10℃ FD-APCS渗透性最强。三组FD-APCS均可作支架材料构建活性角膜基质，-10℃ FD-APCS组基质细胞表现出最强增殖活性。角膜移植证实:FD-APCS植片完全透明时间、体外透过率与APCS无显著差异;胶原纤维间距恢复与正常兔角膜无显著性差异。
结论:磷脂酶A2脱细胞方法制作角膜支架，冷冻干燥技术在-10℃时加IFD-APCS最利于角膜基质细胞生长，角膜移植后植片透明，胶原纤维间距恢复正常。该材料适用于构建活性角膜基质。