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目的:以魔芋葡甘聚糖(KGM)微球为基质,用1,4-丁二醇二缩水甘油醚将KGM微球活化,将胶原蛋白覆层到微球上并对胶原层进行交联,制备覆层均匀、稳定的微载体.考察偶联条件对胶原层的影响以及微载体细胞培养效果的影响.
方法:以直径为160-212μm、粒径均一的KGM微球为基质,采用具有无抗原性、生物相容性好等优点的胶原蛋白进行覆层微球,建立两步偶联蛋白的微载体制备方法,系统考察了各因素对微载体制备的影响.以Vero细胞培养效果为评价指标,优化活化时间、蛋白用量、偶联时间、交联剂用量,获得最佳制备工艺.
结果:考察了偶联条件对微载体表面细胞培养效果的影响，获得了微载体的最佳制备工艺:活化时间为4h、胶原蛋白用量为1g:0.1g(球:蛋白)、偶联时间为5h、交联剂用量为1g:0.5 mL(球:交联剂)，微载体蛋白偶联量为1.16％ (w/w)，静态培养最大细胞密度可达1.7×106 cells/mL，培养效果优于常用的微载体Cytodex 3。采用胰蛋白酶处理可有效将培养的细胞从微载体表面解离，微载体与细胞分离简单，活性细胞回收率高。
结论:证明表面偶联胶原蛋白的KGM微球是一种具有应用前景的胶原覆层型微载体。获得微载体制备工艺具有制备工艺周期短、成本低、利于工业放大等优点，活性细胞回收率高等优点。