【摘 要】
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目的:变形链球菌是致龋能力最强的龋病致病菌.耐酸性和产酸性是变形链球菌生存的一个重要因素.研究表明:ffb、htrA基因的表达与变形链球菌的产酸,耐酸及生物膜的形成密切相
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目的:变形链球菌是致龋能力最强的龋病致病菌.耐酸性和产酸性是变形链球菌生存的一个重要因素.研究表明:ffb、htrA基因的表达与变形链球菌的产酸,耐酸及生物膜的形成密切相关.本研究通过靶向分别沉默ffh、htrA基因后对比变形链球菌在强酸弱酸及各种糖的作用下,其耐氟菌株的产酸性、耐酸性及生物膜的形成等生物学性状的影响.方法:将变形链球菌放入以50ug/ml NaF递加直到在含有1000ug/ml NaF的BHI固体培养基中获得耐氟菌落.将鉴定后的UA159-FR悬液与siRNA oligo按2∶1比例混合加入电转杯中电极选择适合电极.用real time-PCR检测转染效果并筛选siRNA序列.将UA159-FR培养在以0.5为间隔,配置pH从3.5至7.0的培养液中进行耐酸检测收集数据并分析;将UA159-FR培养在含有5%不同糖类的BHI培养液中进行产酸检测收集数据并分析;将UA159-FR培养在放有盖玻片的孔板中观察生物膜的形成.结果:siRNA oligo在UA159-FR中成功干扰ffh、htrA基因表达.应用real-time PCR技术对siRNA序列进行筛选.对干扰后的UA159-FR进行产耐酸检测,干扰htrA基因的数据优于干扰ffh基因的数据.在生物膜构建过程中,干扰htrA基因的UA159-FR没能观察到类似生物膜结构;干扰ffh基因的UA159-FR可观察到类似生物膜结构.结论:成功将siRNA序列电穿孔转染进入变形链球菌耐氟菌株当中,成功分别干扰变形链球菌耐氟菌株的ffh、htrA基因的表达,并成功检测干扰后功能,得出产酸耐酸和生物膜的样本及相关检测数据并分析.
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